Alisertib (MLN8237)

N. catalogoS1133 Lotto:S113314

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Dati tecnici

Formula

C27H20ClFN4O4
Peso molecolare 518.92 Numero CAS 1028486-01-2
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 33 mg/mL (63.59 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Alisertib (MLN8237) è un inibitore selettivo di Aurora A con un'IC50 di 1,2 nM in un saggio senza cellule, e ha una selettività >200 volte superiore per Aurora A rispetto ad Aurora B. Questo composto induce l'arresto del ciclo cellulare, l'apoptosis e l'autophagy. Fase 3.
Target
Aurora A
(Cell-free assay)
1.2 nM
In vitro

Alisertib (MLN8237) mostra una selettività >200 volte superiore per Aurora A rispetto all'Aurora B strutturalmente correlata con un'IC50 di 396,5 nM, e non ha alcuna attività significativa contro altre 205 chinasi. Il trattamento con questo composto (0,5 μM) inibisce la fosforilazione di Aurora A nelle cellule MM1.S e OPM1, senza influenzare la fosforilazione dell'istone H3 mediata da Aurora B. Inibisce significativamente la proliferazione cellulare nelle linee cellulari di mieloma multiplo (MM) con valori di IC50 di 0,003-1,71 μM, e mostra un'attività antiproliferativa più potente contro le cellule MM primarie e le linee cellulari MM in presenza di cellule stromali del midollo osseo, così come IL-6 e IGF-1, rispetto alle sole cellule MM. A 0,5 μM, induce un aumento da 2 a 6 volte della fase G2/M nelle cellule MM primarie e nelle linee cellulari, così come una significativa apoptosi e senescenza, coinvolgendo la sovraregolazione di p53, p21 e p27, così come il clivaggio di PARP, caspasi 3 e caspasi 9. Inoltre, mostra un forte effetto anti-MM sinergico con Hexadecadrol, così come un effetto additivo con doxorubicina e LDP-341. Questo composto (0,5 μM) provoca l'inibizione della formazione di colonie delle linee cellulari di adenocarcinoma esofageo FLO-1, OE19 e OE33, e induce un aumento significativo della percentuale di cellule poliploidi, e successivamente un aumento della percentuale di cellule nella fase sub-G1, che può essere ulteriormente potenziata in combinazione con NSC 119875 (2,5 μM), coinvolgendo la maggiore induzione di TAp73β, PUMA, NOXA, caspasi-3 clivata e PARP clivata rispetto a un trattamento a singolo agente.

In vivo

Alisertib (MLN8237) riduce significativamente il carico tumorale con un'inibizione della crescita tumorale (TGI) del 42% e 80% a 15 mg/kg e 30 mg/kg, rispettivamente, e prolunga la sopravvivenza dei topi rispetto al controllo.

Caratteristiche Primo inibitore di Aurora A disponibile per via orale.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio enzimatico radioattivo Flashplate di Aurora A

    Un saggio enzimatico radioattivo Flashplate di Aurora A viene condotto per determinare la natura e il grado di inibizione mediata da Alisertib (MLN8237) in vitro. La ricombinante Aurora A viene espressa in cellule Sf9 e purificata con cromatografia di affinità GST. Il substrato peptidico per Aurora A è coniugato con biotina (Biotin-GLRRASLG). La chinasi Aurora A (5 nM) viene saggiata in 50 mM Hepes (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0,05% Tween 20, 2 μM di substrato peptidico, 3,3 μCi/mL [γ-33P]ATP a 2 μM e concentrazioni crescenti di questo composto utilizzando Image FlashPlates.
Saggio cellulare:

[2]
  • Linee cellulari

    MM1.S, MM.1R, LR5, RPMI 8226, DOX40, OPM1, OPM2, INA6, and U266

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    24, 48, and 72 hours

  • Metodo

    Cells are exposed to various concentrations of Alisertib (MLN8237) for 24, 48, and 72 hours. Cell viability is measured using MTT assay, and cell proliferation is measured using 3[H]-thymidine incorporation. For cell cycle analysis, cells are permeabilized by 70% ethanol at -20 °C, and incubated with 50 μg/mL PI and 20 units/mL RNase-A. DNA content is analyzed by flow cytometry using BDFACS-Canto II and FlowJo software. For the detection of apoptosis and senescence, cells are stained with Resorcinolphthalein isothiocyanate-annexin V and PI. Apoptotic cells are determined by flow cytometric analysis using BDFACS-Canto II and FlowJo software.
Studio sugli animali:

[2]
  • Modelli animali

    Severe combined immune-deficient (SCID) mice inoculated subcutaneously with MM1.S cells

  • Dosaggi

    ~30 mg/kg/day

  • Somministrazione

    Orally

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22016509/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20382844/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22302096/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Alisertib inhibits AURKA and AURKB in a concentration-dependent manner. (a) Alisertib induces G 2 /M delay or genome reduplication. HeLa cells were exposed to buffer or the indicated concentrations of Alisertib. After 24 h, the cells were harvested and analyzed with flow cytometry. The positions of 2N, 4N and 8N DNA contents are indicated. (b) Alisertib delays mitotic exit or induces slippage. HeLa cells stably expressing histone H2B-GFP were exposed to buffer or the indicated concentrations of Alisertib. Individual cells were then tracked for 24 h with time-lapse microscopy. Each horizontal bar represents one cell (n ¼ 50). Key: light gray ¼ interphase; black ¼ mitosis (from DNA condensation to anaphase or mitotic slippage); dark gray ¼ interphase after mitotic slippage; truncated bars ¼ cell death. (c) Different concentrations of Alisertib are involved in delaying mitotic exit and inducing slippage. Live-cell imaging of cells treated with Alisertib was described in panel (b). The duration of mitosis (mean±90% confidence interval) and the percentage of cells that underwent mitotic slippage during the imaging period was quantified. (d) Alisertib promotes apoptosis in a concentration-dependent manner. HeLa cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 48 h. The cells were then harvested and analyzed with flow cytometry. (e) Concentration-dependent cytotoxicity of Alisertib. HeLa cells were cultured in the presence of the indicated concentrations of Alisertib for 48 h. The number of live and dead cells was analyzed with trypan blue exclusion assay. (f) Concentration-dependent suppression of long-term survival by Alisertib. HeLa cells were seeded on 60-mm culture plates and grown in the presence of 250 n M or 1 m M of Alisertib. After 24 h, the cells were washed gently and propagated in normal medium for another 10–12 days. Colonies were fixed and stained with crystal violet solution (examples of the plates are shown). Average±s.d. from three independent experiments. (g) Both AURKA and AURKB are inhibited by Alisertib.Mitotic HeLa cells were obtained by exposure to nocodazole for 16 h followed by mechanical shake off. The cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 2 h. Lysates were then prepared and activated phospho-AURKAThr288 and AURKBThr232were detected with immunoblotting. The asterisk indicates the position of an AURKB-like protein (the same throughout this study). Uniform loading was confirmed by immunoblotting for actin. In this assay, nocodazole and MG132 (a proteasome inhibitor) were added to prevent the cells from exiting mitosis. Accordingly, the total AURKA and AURKB levels remained constant throughout the experiment. (h) Alisertib prevents activation of AURKA and AURKB. HeLa cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 8 h. Nocodazole was then added for another 6 h to trap cells that entered mitosis. Lysates were prepared and analyzed with immunoblotting. Actin analysis was included to assess loading and transfer.</p>

Dati da [ Oncogene , 2014 , 33, 3550-60 ]

Tissue levels of 53BP1, a-tubulin, IkB-a and IL-6 in an Hs294T xenograft treated with MLN8237 or vehicle control were visualized by immunofluorescence co-staining with DAPI. Representative micrographs are shown from triplicate experiments.

Dati da [ EMBO Mol Med , 2013 , 5(1), 149-66 ]

Inhibition of Aurka kinase activity by MLN8237 impairs expression of pluripotency genes in CCE cells as measured by qRT-PCR. All values shown are mean ?SEM for n=3. The level of phosphorylated H3(S10) (p-H3(S10)), an Aurka phosphorylation target site, is decreased in MLN8237-treated samples.

Dati da [ Cell Stem Cell , 2012 , 11, 179-94 ]

<p>Recruitment of clathrin to the mitotic spindle is controlled by phosphorylation of TACC3 by Aurora-A kinase. Representative micrographs of HEK293 cells incubated with 0.3 μM MLN8237 for 40 min. Cells were fixed and stained as indicated.</p>

Dati da [ EMBO J , 2012 , 30, 906-19 ]

Sellecks Alisertib (MLN8237) È stato citato da 380 Pubblicazioni

Centromere protection requires strict mitotic inactivation of the Bloom syndrome helicase complex [ Nat Commun, 2025, 16(1):7832] PubMed: 40846865
Aurora A regulates the material property of spindle poles to orchestrate nuclear organization at mitotic exit [ EMBO J, 2025, 10.1038/s44318-025-00564-4] PubMed: 40940421
Targeted inhibition of Aurora kinase A promotes immune checkpoint inhibition efficacy in human papillomavirus-driven cancers [ J Immunother Cancer, 2025, 13(1)e009316] PubMed: 39773561
An Aurora kinase A-BOD1L1-PP2A B56 axis promotes chromosome segregation fidelity [ Cell Rep, 2025, 44(2):115317] PubMed: 39970043
The AURKA inhibitor alters the immune microenvironment and enhances targeting B7-H3 immunotherapy in glioblastoma [ JCI Insight, 2025, e173700] PubMed: 39928563
CDK1-mediated phosphorylation of LDHA fuels mitosis through LDHB-dependent lactate oxidation [ EMBO Rep, 2025, 10.1038/s44319-025-00573-8] PubMed: 40940446
Cellular senescence as a prognostic marker for predicting breast cancer progression in 2D and 3D organoid models [ Biomed Pharmacother, 2025, 189:118324] PubMed: 40616881
Actionable heterogeneity of hepatocellular carcinoma therapy-induced senescence [ Cancer Immunol Immunother, 2025, 74(7):207] PubMed: 40374812
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023] PubMed: 40795355
O 6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) expression in U1242 glioblastoma cells enhances in vitro clonogenicity, tumor implantation in vivo, and sensitivity to alisertib-carboplatin combination treatment [ Front Cell Neurosci, 2025, 19:1552015] PubMed: 40336841

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