Afatinib (BIBW2992)

N. catalogoS1011 Lotto:S101113

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Dati tecnici

Formula

C24H25ClFN5O3
Peso molecolare 485.94 Numero CAS 850140-72-6
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (199.61 mM)
Ethanol 90 mg/mL (185.2 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Afatinib inibisce irreversibilmente EGFR/ErbB in vitro con IC50 di 0,5, 0,4, 10, 14, 1 nM per EGFRwt, EGFR L858R , EGFR L858R/T790M ErbB2 (HER2) ed ErbB4 (HER4), rispettivamente. Questo composto induce l'autofagia.
Target
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 ErbB4
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 1 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 mostra una potente attività contro le forme sia wild-type che mutanti di EGFR e HER2. È simile al Gefitinib in potenza contro l'EGFR L858R, ma circa 100 volte più attivo contro il doppio mutante L858R-T790M EGFR resistente al Gefitinib. Questo composto esibisce potenti effetti sulla fosforilazione di EGFR e HER2 in vivo. Si confronta favorevolmente con i composti di riferimento (come Lapatinib et al.) in tutti i tipi di cellule testati, come la linea cellulare di carcinoma epidermoide umano A431 che esprime EGFR wt, le cellule murine NIH-3T3 trasfettate con HER2 wt, così come la linea cellulare di cancro al seno BT-474 e la linea cellulare di cancro gastrico NCI-N87, che esprimono HER2 endogeno.
In vivo La somministrazione orale giornaliera di BIBW2992 a 20 mg/kg per 25 giorni determina una regressione tumorale drammatica con un rapporto cumulativo volume tumorale trattato/controllo (rapporto T/C) del 2%. La ridotta fosforilazione di EGFR e AKT è confermata mediante colorazione immunoistochimica delle sezioni tissutali. Pertanto, come lapatinib e neratinib, questo composto è un inibitore della Protein Tyrosine Kinase (TKI) di nuova generazione che inibisce irreversibilmente le Protein Tyrosine Kinasi del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano (Her2) e del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR). Non è solo attivo contro le mutazioni di EGFR bersagliate dai TKI di prima generazione come Erlotinib o Gefitinib, ma anche contro quelle insensibili a queste terapie standard.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggi di attività chinasica in vitro

    Il dominio Protein Tyrosine Kinase wild type dell'EGFR umano, così come quello del doppio mutante EGFR L858R/T790M, sono fusi alla glutatione-S-transferasi (GST) ed estratti. L'attività enzimatica viene quindi saggiata in presenza dell'inibitore BIBW2992, diluito in serie in DMSO al 50%. Un polimero casuale pEY (4:1) viene utilizzato come substrato e il pEY biotinilato (bio-pEY) viene aggiunto come substrato tracciante. Il dominio Protein Tyrosine Kinase di HER2 viene clonato utilizzando il sistema del baculovirus ed estratto in modo simile a quello della Protein Tyrosine Kinase EGFR. I dettagli dei saggi per l'attività chinasica di EGFR, HER2, SRC, BIRK e VEGFR2 sono disponibili nelle informazioni supplementari.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    NSCLC cells

  • Concentrazioni

    0-10 μM

  • Tempo di incubazione

    1 hour

  • Metodo

    1 × 104 NSCLC cells are transferred into each well of a 96-well plate and cultured overnight in serum-free media for the EGFR phosphorylation assay. After addition of this compound on the next day, the plates are incubated at 37 °C for 1 hour. EGF-stimulation is done using 100 ng/mL for 10 min at room temperature. Cells are washed with ice cold PBS, extracted with 120 μL HEPEX buffer per well and shaken at room temperature for 1 hour. In all 2 × 104 cells per well is used for the HER2 phosphorylation assay. Streptavidin precoated plates are coated with anti-EGFR-biotin at 1:100 dilution in blocking buffer and c-erb2/HER2 oncoprotein Ab-5(Clone N24)-Biotin. Cell extracts is then transferred to the antibody-coated wells and incubated at room temperature for 1 hour. Extinction is measured at 450 nm.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Athymic NMRI-nu/nu female mice

  • Dosaggi

    20 mg/kg

  • Somministrazione

    Oral administration

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18408761/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24266694/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Dati da [ Int J Proteomics , 2011 , 2011, 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Dati da [ Int J Proteomics , 2011 , 2011, 215496 ]

<p>After starved in serum-free medium for 24h, Breast cancer cells incubated with the indicated concentrations of BIBW2992 for 3h,followed by 15-minute stimolation of 100ng/ml EGF</p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Immunoblot analysis of serum starved H2030 cells pre-treated with 500 nM or 1 µM of gefitinib, crizotinib, CP-724714, or afatinib for 12 hr, followed by stimulation with EGF, HGF, NRG1, or their combination (50 ng/ml) for 10 min.

Dati da [ , , Nature, 2016, 534(7609):647-51 ]

Sellecks Afatinib (BIBW2992) È stato citato da 453 Pubblicazioni

Lysosomal EGFR acts as a Rheb-GEF independent of its kinase activity to activate mTORC1 [ Cell Res, 2025, 10.1038/s41422-025-01110-x] PubMed: 40259053
Longitudinal single-cell multiomic atlas of high-risk neuroblastoma reveals chemotherapy-induced tumor microenvironment rewiring [ Nat Genet, 2025, 10.1038/s41588-025-02158-6] PubMed: 40229600
The potential of lazertinib and amivantamab combination therapy as a treatment strategy for uncommon EGFR-mutated NSCLC [ Cell Rep Med, 2025, 6(2):101929] PubMed: 39874964
AP1-mediated reprogramming of EGFR expression triggers resistance to BLU-667 and LOXO-292 in RET-rearranged tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):154] PubMed: 40405293
Anti-galectin-9 therapy synergizes with EGFR inhibition to reprogram the tumor microenvironment and overcome immune evasion [ J Immunother Cancer, 2025, 13(7)e010926] PubMed: 40664443
Blocking cancer-fibroblast mutualism inhibits proliferation of endocrine therapy resistant breast cancer [ Mol Syst Biol, 2025, 10.1038/s44320-025-00104-6] PubMed: 40341770
PI3K-dependent GAB1/Erk phosphorylation renders head and neck squamous cell carcinoma sensitive to PI3Kα inhibitors [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):457] PubMed: 40533463
Exercise-induced adipokine Nrg4 alleviates MASLD by disrupting hepatic cGAS-STING signaling [ Cell Rep, 2025, 44(2):115251] PubMed: 39891907
Rare mutations at EGFR L747 position: molecular characteristics and superior response to afatinib in NSCLC patients [ ESMO Open, 2025, 10(9):105558] PubMed: 40834500
PTEN loss and ERBB2/ERBB3-mediated AKT reactivation drive resistance to MET inhibition in MET-amplified hepatocellular carcinoma [ Cell Oncol (Dordr), 2025, 10.1007/s13402-025-01097-y] PubMed: 40991144

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