Afatinib Dimaleate

N. catalogoS7810 Lotto:S781003

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Dati tecnici

Formula

C24H25ClFN5O3.2C4H4O4
Peso molecolare 717.18 Numero CAS 850140-73-7
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (139.43 mM)
Water 50 mg/mL (69.71 mM)
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Afatinib Dimaleate inibisce irreversibilmente EGFR/HER2 inclusi EGFR(wt), EGFR(L858R), EGFR(L858R/T790M) e HER2 con IC50 di 0,5 nM, 0,4 nM, 10 nM e 14 nM, rispettivamente; 100 volte più attivo contro il mutante L858R-T790M EGFR resistente a Gefitinib. Afatinib (BIBW2992) Dimaleate induce l'autophagy.
Target
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 è più efficace di erlotinib, gefitinib o lapatinib nell'inibire la sopravvivenza delle linee cellulari di cancro del polmone che ospitano EGFR wild-type (H1666) o L858R/T790M (NCI-H1975). BIBW2992 è ugualmente efficace contro le linee NSCLC che esprimono HER2 776insV (NCI-H1781) o EGFR E746_A750del (HCC827), ma non mostra attività verso le cellule A549, che esprimono EGFR e HER2 wild-type. Afatinib aumenta la citotossicità di topotecano e mitoxantrone nelle cellule SP e aumenta l'apoptosi indotta da topotecano e mitoxantrone nelle cellule SP.
In vivo Nel modello di xenotrapianto MDA-MB-453, BIBW2992 (20 mg/kg, p.o.) determina una drammatica regressione tumorale con un rapporto cumulativo volume tumorale trattato/controllo (rapporto T/C) del 2% e una down-regolazione della fosforilazione di EGFR e AKT. Nei modelli di xenotrapianto A7, A431, FaDu, UT-SCC-14 e UT-SCC-15, l'applicazione di BIBW 2992 (30 mg/kg, p.o.) porta a un significativo prolungamento del tempo di crescita tumorale. Nel modello di xenotrapianto amplificato HER2, Afatinib (30 mg/kg, p.o.) determina una marcata inibizione della crescita tumorale e un significativo miglioramento della durata della sopravvivenza complessiva. Nel xenotrapianto di cancro gastrico HER2-positivo NCI-N87, afatinib (25 mg/kg, p.o.) porta a una drammatica regressione del volume tumorale entro 4 giorni e una risoluzione tumorale quasi completa dopo 21 giorni di trattamento.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggio di attività chinasica in vitro

    EGFR chinasi: Ogni reazione enzimatica da 100 µL conteneva 10 μL di inibitore in 50% Me2SO, 20 μL di soluzione di substrato (200 mM HEPES pH 7,4, 50 mM Mg-acetato, 2,5 mg/mL poly (EY), 5 μg/mL bio-pEY) e 20 µL di preparazione enzimatica. La reazione enzimatica viene avviata aggiungendo 50 µL di una soluzione di ATP 100 µM preparata in 10 mM MgCl2. I saggi vengono eseguiti a temperatura ambiente per 30 min e terminati con l'aggiunta di 50 µL di soluzione di stop (250 mM EDTA in 20 mM HEPES pH 7,4). 100 µL vengono trasferiti su una micropiastra rivestita di streptavidina, dopo un tempo di incubazione di 60 min a temperatura ambiente la piastra viene lavata con 200 µL di soluzione di lavaggio (50 mM Tris, 0,05% Tween20). Un'aliquota di 100 µL di un anticorpo anti-PY marcato con HRPO (PY20H Anti-Ptyr:HRP) 250 ng/mL viene aggiunta ai pozzetti. Dopo 60 min di incubazione, la piastra viene lavata tre volte con 200 µL di soluzione di lavaggio. I campioni vengono quindi sviluppati con 100 µL di soluzione di TMB Peroxidase (A:B= 1:1). La reazione viene interrotta dopo 10 min. La piastra viene trasferita a un lettore ELISA e l'estinzione viene misurata a OD450nm. Enzima HER2-IC: L'attività enzimatica viene saggiata in presenza o assenza di diluizioni seriali di inibitore eseguite in 50 % Me2SO. Ogni reazione da 100 µL contiene componenti simili a quelli descritti per il saggio della chinasi EGFR con l'aggiunta di 1000 µM Na3VO4. La reazione enzimatica viene avviata aggiungendo 50 µL di soluzione di ATP 500 µM preparata in 10 mM Mg-acetato. La diluizione dell'enzima è impostata in modo che l'incorporazione di fosfato in bio-pEY sia lineare rispetto al tempo e alla quantità di enzima. La preparazione enzimatica viene diluita in 20 mM HEPES pH 7,4, 130 mM NaCl, 0,05% Triton X-100, 1 mM DTT e 10% glicerolo. I saggi vengono eseguiti a temperatura ambiente per 30 min e terminati con l'aggiunta di 50 µL di soluzione di stop. Saggi della chinasi Src: Ogni reazione da 100 µL conteneva 10 µL di inibitore in 50 % Me2SO, 20 µL di preparazione enzimatica, 20 µL di soluzione di substrato integrata con 1000 µM Na3VO4. La reazione enzimatica viene avviata aggiungendo 50 µL di una soluzione di ATP 1000 µM preparata in 10 mM Mg-acetato. Saggio della chinasi BIRK: 250 mM Tris pH 7,4, 10 mM DTT, 2,5 mg/mL poly(EY), 5 mg/mL bio-pEY viene utilizzato come soluzione di substrato e la reazione enzimatica viene avviata aggiungendo 50 µL di una soluzione di ATP 2 mM preparata in 8 mM MnCl2, 20 mM Mg-acetato. Saggi della chinasi VEGF2 e HGFR: I saggi vengono eseguiti a temperatura ambiente per 20 minuti e terminati con l'aggiunta di 10 µL di 5 % H3PO4. Il precipitato viene quindi intrappolato su filtri GF/B utilizzando un raccoglitore universale a 96 pozzetti. Dopo un lavaggio approfondito, la piastra del filtro viene asciugata per 1 h a 50°C, sigillata e la radioattività incorporata viene determinata mediante conteggio a scintillazione utilizzando un TopCount™ o un contatore Microbeta b™.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    SP and NSP cell lines

  • Concentrazioni

    1 μM

  • Tempo di incubazione

    48 h

  • Metodo

    Cytotoxicity is determined using MTT assay. The IC 50 value is defined as the drug concentration resulting in 50% cell death. Both the fitted sigmoidal dose response curve and IC50 are calculated by Bliss method.
Studio sugli animali:[4]
  • Modelli animali

    SCID mice harbouring ARK2 xenografts

  • Dosaggi

    25 mg/kg

  • Somministrazione

    p.o.

Riferimenti

  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2748240/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24972892/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25444177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25268372/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23578997/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Dati da [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Dati da [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

(F) Stably transduced MCF10A cells were treated with the indicated drugs at 100 nM for 4 h in EGF- and serum-free media. Cell lysates were subjected to immunoblot analyses with the indicated antibodies.

Dati da [ , , Cancer Discov, 2017, 7(6):575-585 ]

Immunoblotting of lysates from EGFR L858R and EGFR L858M/L861Q NIH-3T3 cells treated with the indicated concentrations of gefitinib, osimertinib, or afatinib. The ratio of phospho-EGFR in treated vs. untreated samples was quantified by densitometry for each cell line.

Dati da [ , , J Thorac Oncol, 2017, 12(5):884-889 ]

Sellecks Afatinib Dimaleate È stato citato da 173 Pubblicazioni

Human fetal brain self-organizes into long-term expanding organoids [ Cell, 2024, 187(3):712-732.e38] PubMed: 38194967
Clinical efficacy and identification of factors confer resistance to afatinib (tyrosine kinase inhibitor) in EGFR-overexpressing esophageal squamous cell carcinoma [ Signal Transduct Target Ther, 2024, 9(1):153] PubMed: 38937446
Romidepsin and afatinib abrogate JAK-STAT signaling and elicit synergistic antitumor effects in cutaneous T-cell lymphoma [ J Invest Dermatol, 2024, S0022-202X(23)03210-4] PubMed: 38219917
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
HB-EGF activates EGFR to induce reactive neural stem cells in the mouse hippocampus after seizures [ Life Sci Alliance, 2024, 7(9)e202201840] PubMed: 38977310
Discovery of nontriterpenoids from the rot roots of Panax notoginseng with cytotoxicity and their molecular docking study and experimental validation [ RSC Adv, 2023, 13(16):11037-11043] PubMed: 37033442
Irreversible tyrosine kinase inhibitors induce the endocytosis and downregulation of ErbB2 [ Biochem Biophys Rep, 2023, 34:101436] PubMed: 36824069
Silent mutations reveal therapeutic vulnerability in RAS Q61 cancers [ Nature, 2022, 603(7900):335-342] PubMed: 35236983
Group 3 innate lymphoid cells produce the growth factor HB-EGF to protect the intestine from TNF-mediated inflammation [ Nat Immunol, 2022, 23(2):251-261] PubMed: 35102343
PI3Kγ stimulates a high molecular weight form of myosin light chain kinase to promote myeloid cell adhesion and tumor inflammation [ Nat Commun, 2022, 13(1):1714] PubMed: 35361816

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