A-674563 HCl

N. catalogoS2670 Lotto:S267001

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Dati tecnici

Formula

C22H22N4O.CIH
Peso molecolare 394.9 Numero CAS 2070009-66-2
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 72 mg/mL (182.32 mM)
Water 72 mg/mL (182.32 mM)
Ethanol 18 mg/mL (45.58 mM)
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 30.000mg/ml (75.97mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione A-674563 HCl è un inibitore di Akt1 con Ki di 11 nM in saggi acellulari, modesta potenza verso PKA e >30 volte selettivo per Akt1 rispetto a PKC.
Target
Akt1
(Cell-free assay)		 PKA
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 ERK2
(Cell-free assay)		 Visualizza altro
11 nM(Ki) 16 nM(Ki) 46 nM(Ki) 110 nM(Ki) 260 nM(Ki)
In vitro

A-674563 HCl è ottenuto da A-443654 sostituendo l'indolo con una porzione fenilica e ottenendo attività orale. A-674563 rallenta la proliferazione delle cellule tumorali con EC50 di 0,4 μM. A-674563 non inibisce la fosforilazione di Akt per sé, ma blocca la fosforilazione dei bersagli a valle di Akt in modo dose-dipendente. Il blocco di Akt indotto da A-674563 si traduce in una ridotta fosforilazione dei bersagli a valle delle cellule STS e in un'inibizione della crescita delle cellule tumorali. A-674563 induce l'arresto del ciclo cellulare in fase G2 e l'apoptosi nelle cellule STS.

In vivo

A-674563 non mostra un'attività inibitoria tumorale significativa in monoterapia; l'efficacia della terapia di combinazione è significativamente migliorata rispetto alla monoterapia. I topi trattati con A674563 (20 mg/kg/bid, p.o.) mostrano una crescita tumorale più lenta e una diminuzione di oltre il 50% del volume tumorale alla fine dello studio rispetto al gruppo di controllo. A-674563 è stato identificato per avere un profilo PK drasticamente migliorato con una biodisponibilità orale del 67% nel topo, ma è 70 volte meno attivo di A-443654.

Caratteristiche Composto biodisponibile per via orale (ottenuto sostituendo l'indolo di A-443654 con una porzione fenilica) e in qualche modo meno selettivo per Akt rispetto a PKA rispetto a A-443654.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio di Akt Kinase

    Il saggio della chinasi utilizza His-Akt1 e un peptide Bad di topo biotinilato come substrato. Il saggio della chinasi viene eseguito a temperatura ambiente per 30 minuti in 50 μL di tampone di reazione [20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM MgCl2, 0,1% (p/v) Triton X-100, 5 μM ATP (Km = 40 μM), 5 μM peptide (Km = 15 μM), 1 mM DTT, 60 ng di Akt1 e 0,5 μCi di [γ-33P]ATP] in presenza di diverse concentrazioni di A-674563. Ogni reazione viene interrotta aggiungendo 50 μL di tampone di terminazione (0,1 M EDTA, pH 8,0, e 4 M NaCl). I peptidi Bad biotinilati sono immobilizzati su piastre FLASH rivestite di streptavidina. Dopo il lavaggio con PBS-Tween 20 (0,05%), il fosfopeptide 33P catturato sulle piastre FLASH viene misurato con un contatore γ TopCount Packard Instruments.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    MiaPaCa-2 cells

  • Concentrazioni

    0-30 μM

  • Tempo di incubazione

    48 hours

  • Metodo

    The cells on 96-well plates are gently washed with 200 μL of PBS. Alamar Blue reagent is diluted 1:10 in normal growth media. The diluted Alamar Blue reagent (100 M) is added to each well on the 96-well plates and incubated until the reaction is complete as per manufacturer's instructions. Analysis is done using an fmax Fluorescence Microplate Reader, set at the excitation wavelength of 544 nm and emission wavelength of 595 nm. Data are analyzed using SOFTmax PRO software provided by the manufacturer.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Fasted mice

  • Dosaggi

    20 or 100 mg/kg

  • Somministrazione

    A-674563 is administered 30 minutes before the 1 g/kg glucose challenge.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15956255/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20582381/
  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2932704/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>B cells were pre-treated with the indicated concentrations of A-674563 for 1h prior to R848 treatment (500 ng/ml).  Thymidine incorporation was analyzed 24h later.</p>

, 2012 , Lee lay hoon from National University of Singapore

<p>Akt1 and Akt2 isoforms are required for Wnt5a-induced RhoA activity. a, c Human osteosarcoma cells MG-63 (a) and U20S (c), serum-deprived for 24 h, were pre-treated with 10 nmol/L MK-2206 (Akt inhibitor) for 1 h, were incubated with 100 ng/mL Wnt5a and harvested at 30 min after the start of Wnt5a treatment. The relative RhoA activity was normalized to the average value of LY294002/Wnt5a-untreated group. b, d Serum-deprived MG-63 (b) and U20S cells (d) were pre-treated with 10 nmol/L A-674563 (Akt1 inhibitor) and 10 nmol/L CCT128930 (Akt2 inhibitor) for 1 h, then were incubated with 100 ng/mL Wnt5a and harvested at 30 min after the start of Wnt5a treatment. Data were presented as mean ± SD of 3 determinations. The relative RhoA activity was normalized to the average value of each inhibitor-untreated group</p>

, , Cancer Cell Int, 2017, 17:27

Cell survival was determined using a WST-1 assay in the human lung cancer cells A549 A. and NCI-H358 B. following treatment with either an AKT1 specific inhibitor, A-674563 (black circle and line) or a pan-AKT inhibitor MK-2206 (gray square and line). *p < 0.05.

Dati da [ , , Oncotarget, 2016, 7(3):3297-316 ]

Sellecks A-674563 HCl È stato citato da 29 Pubblicazioni

Medium from human iPSC-derived primitive macrophages promotes adult cardiomyocyte proliferation and cardiac regeneration [ Nat Commun, 2025, 16(1):3012] PubMed: 40148355
Disruption of lysosomal nutrient sensing scaffold contributes to pathogenesis of a fatal neurodegenerative lysosomal storage disease [ J Biol Chem, 2024, 300(2):105641] PubMed: 38211816
Methionine adenosyltransferase2A inhibition restores metabolism to improve regenerative capacity and strength of aged skeletal muscle [ Nat Commun, 2023, 14(1):886] PubMed: 36797255
Functional restoration of lysosomes and mitochondria through modulation of AKT activity ameliorates senescence [ Exp Gerontol, 2023, 173:112091] PubMed: 36657533
Antagonistic effect of cyclin-dependent kinases and a calcium-dependent phosphatase on polyglutamine-expanded androgen receptor toxic gain of function [ Sci Adv, 2023, 9(1):eade1694] PubMed: 36608116
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Reducing Akt2 in retinal pigment epithelial cells causes a compensatory increase in Akt1 and attenuates diabetic retinopathy [ Nat Commun, 2022, 13-1:6045] PubMed: 36229454
Cyclin B/CDK1 and Cyclin A/CDK2 phosphorylate DENR to promote mitotic protein translation and faithful cell division [ Nat Commun, 2022, 13(1):668] PubMed: 35115540
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Akt isoforms differentially provide for chemoresistance in prostate cancer [ Cancer Biol Med, 2021, j.issn.2095-3941.2020.0747] PubMed: 34591413

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