Degrasyn (WP1130)

Oltre a indurre una rapida down-regulation di Bcr/Abl senza influenzare Bcr o c-Abl, Degrasyn (WP1130) regola anche la stabilità di Jak2 e c-Myc senza influenzare altre chinasi (HER1, HER2, c-Kit, FAK, ERK1, ERK2, Akt, Btk, Src e Src-related kinases) o fattori di trascrizione (p53 wild-type, STAT1, STAT3, STAT5, c-Jun, NF-κB e Max). A differenza dell'adaphostin, questo composto induce la down-regulation di Bcr/Abl entro 60 minuti. È più efficace nell'indurre l'Apoptosis delle cellule tumorali mieloidi e linfoidi con IC50 di ~0,5-2,5 μM rispetto ai precursori ematopoietici CD34⁺ normali, ai fibroblasti dermici o alle cellule endoteliali con IC50 di ~5-10 μM. Questo composto chimico (5 μM) down-regola specificamente e rapidamente sia la proteina Bcr/Abl wild-type che la mutante T315I senza influenzare l'espressione del gene bcr/abl o attivare la via di degradazione proteasomica nelle cellule di leucemia mieloide cronica (LMC), accompagnato dall'induzione dell'Apoptosis. È più efficace nel ridurre la formazione di colonie di cellule leucemiche rispetto alle cellule progenitrici normali ed è efficace contro le cellule leucemiche primarie che ospitano la mutazione T315I. [1] Questo composto induce una rapida degradazione proteasoma-dipendente della proteina c-Myc nel mieloma multiplo MM-1 e in altre linee cellulari tumorali, correlata all'inibizione della crescita tumorale. [2] A differenza di AG490, agisce come un inibitore di deubiquitinasi (DUB) parzialmente selettivo per indurre un rapido e marcato accumulo di proteine poliubiquitinate (legate K48/K63) in aggresomi iuxtanucleari senza influenzare l'attività del proteasoma. Questo composto chimico (5 μM) inibisce direttamente l'attività DUB di USP9x, USP5, USP14, UCH-L1 e UCH37, ma non di UCH-L3, con conseguente down-regulation delle proteine antiapoptotiche e up-regulation delle proteine proapoptotiche, come MCL-1 e p53. [3]

La somministrazione di WP1130 inibisce la crescita dei tumori K562 e delle cellule BaF/3 che esprimono Bcr/Abl wild-type e Bcr/Abl mutante T315I trapiantate in topi nudi. [1] In linea con la down-regulation di c-Myc, questo composto mostra una potente attività inibitoria contro i tumori del melanoma A375 stabiliti in topi nudi. [2]

• Linee cellulari

  BV173, BV173R, K562, and BaF/3

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cells are treated with increasing concentrations of WP1130 (0.08-10 μM) in 96-well plates. Plates are incubated at 37 °C for 72 hours, after which 20 μL of MTT reagent is added, and the plates are incubated at 37 °C for another 2 hours. Cells are lysed with 100 μL lysis buffer (20% sodium dodecyl sulfate [SDS] in 50% N, N-dimethylformamide adjusted to pH 4.7 with 80% acetic acid and 1 M hydrochloric acid; final concentration of acetic acid is 2.5% and hydrochloric acid is 2.5%) and incubated for 6 hours. The optical density of each sample at 570 nm is determined with a SPECTRA MAX M2 plate reader.

• Modelli animali

  Swiss Nu/Nu mice transplanted with K562 tumor cells, BaF/3wt cells, or BaF/3/T315I cells

• Dosaggi

  ~40 mg/kg every other day

• Somministrazione

  Injected intraperitoneally