Tozasertib (VX-680)

N. catalogoS1048 Lotto:S104806

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Dati tecnici

Formula

C23H28N8OS
Peso molecolare 464.59 Numero CAS 639089-54-6
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 49 mg/mL (105.46 mM)
Ethanol 49 mg/mL (105.46 mM)
Water 3 mg/mL (6.45 mM)
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Tozasertib (VX-680) è un inibitore pan-Aurora, principalmente contro Aurora A con un Kiapp di 0,6 nM in un saggio senza cellule, meno potente verso Aurora B/Aurora C e 100 volte più selettivo per Aurora A rispetto ad altre 55 chinasi. Le uniche eccezioni sono la Fms-related tyrosine kinase-3 (FLT-3) e la BCR-ABL tyrosine kinase, che sono inibite da questo composto con un Ki di 30 nM per entrambe. Induce apoptosi e autophagy, ed è in Fase 2.
Target
Aurora A
(Cell-free assay)		 Aurora C
(Cell-free assay)		 Aurora B
(Cell-free assay)		 FLT3
(Cell-free assay)		 Bcr-Abl
(Cell-free assay)
0.6 nM(Ki app) 4.6 nM(Ki app) 18 nM(Ki app) 30 nM(Ki) 30 nM(Ki)
In vitro Nonostante il suo profilo multi-chinasico, Tozasertib (VX-680) induce una citotossicità simile con un IC50 di circa 300 nM e mostra un fenotipo inibitorio simile a AUR B di arresto G2/M, endoreduplicazione e apoptosi nelle cellule BaF3 trasfettate con chinasi ABL o FLT-3 (mutante e wild type). Questo composto previene la proliferazione di CAL-62 in modo tempo-dipendente. Il trattamento per 14 giorni diminuisce significativamente il numero e la dimensione delle colonie di circa il 70% nel 8305C e del 90% nel CAL-62, 8505C e BHT-101. Il trattamento delle diverse cellule ATC con esso inibisce la proliferazione con un IC50 tra 25 e 150 nM. Compromette significativamente la capacità delle diverse linee cellulari di formare colonie in agar molle. L'analisi dell'attività della caspasi-3 indica che VX-680 induce apoptosi nelle diverse linee cellulari. Le cellule CAL-62 esposte per 12 ore al composto hanno mostrato un accumulo di cellule con un contenuto di DNA ≥4N. L'analisi time-lapse dimostra che le cellule CAL-62 trattate escono dalla metafase senza dividersi. Inoltre, la fosforilazione dell'istone H3 è abrogata in seguito al suo trattamento. Ha una significativa attività inibitoria contro BCR-Abl portante la mutazione T315I in campioni derivati da pazienti.
In vivo Tozasertib (VX-680) provoca una marcata diminuzione delle dimensioni del tumore in un modello di xenotrapianto di AML umana (HL-60). Nei topi nudi trattati con esso a 75 mg/kg, due volte al giorno per via intraperitoneale (b.i.d. i.p.) per 13 giorni, i volumi medi del tumore sono ridotti del 98%. La diminuzione della crescita tumorale è dose-dipendente e significativa a una dose di 12,5 mg/kg b.i.d. Questo composto è ben tollerato, con una piccola diminuzione del peso corporeo osservata solo alla dose più alta. Innesca anche la regressione tumorale in modelli di xenotrapianto pancreatici e del colon. Tozasertib mostra anche una potente attività antitumorale se infuso per via endovenosa in ratti nudi portatori di tumori HCT116 consolidati. Una dose più alta (2 mg/kg/h) migliora l'efficacia con una diminuzione del 56% del volume tumorale medio.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[3]
  • Saggi di inibizione della chinasi

    Il consumo di ATP è accoppiato, tramite la coppia enzimatica piruvato chinasi/lattato deidrogenasi, all'ossidazione del NADH, che può essere monitorata attraverso la diminuzione dell'assorbimento a 340 nm. Le reazioni contengono 100 mM Tris (pH 8), 10 mM MgCl2, 2,2 mM ATP, 1 mM fosfoenolpiruvato, 0,6 mg/mL NADH, 75 unità/mL piruvato chinasi, 105 unità/mL lattato deidrogenasi e 0,5 mM di peptide substrato (sequenza: EAIYAAPFAKKK). Le reazioni (75 μL) vengono avviate aggiungendo una quantità sufficiente di chinasi per portare le reazioni a una concentrazione di chinasi di 30 nM e la diminuzione dell'assorbanza viene monitorata per 30 minuti a 30°C in uno spettrofotometro per micropiastre. Le costanti inibitorie sono ottenute mediante l'aggiunta di 3,75 μL di Tozasertib (VX-680) in DMSO al 100% o solo DMSO. I valori di Ki sono calcolati come segue: K i = IC50 / (1 + [S]/Kd), dove [S] = [ATP] = 2,2 mM, e Kd (dell'ATP all'Abl) = 70 μM. Questi valori sono calcolati assumendo un Kd (ATP) di 70 μM per il dominio chinasico Abl di tipo selvaggio e H396P.
Saggio cellulare:

[2]
  • Linee cellulari

    CAL-62 cells

  • Concentrazioni

    5-500 nM

  • Tempo di incubazione

    4 days

  • Metodo

    The CAL-62 cells are cultured in the absence (dimethyl sulfoxide, DMSO) or the presence of 500  nM Tozasertib (VX-680) for different periods of time (1-5 days). The dose-dependent effects of this compound on cell proliferation are evaluated by treating the different ATC cells for 4 days with different concentrations of the Aurora inhibitor (5–500  nM). The cells are pulse labeled with 30  mM BrdU for 2  hours before the end of the incubation time. The BrdU incorporation is analyzed by means of a colorimetric immunoassay using the cell proliferation ELISA kit. The results from VX-680-treated cells are compared with those observed in control cells and expressed as a fold of variation versus control.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Female athymic NCr-nu mice bearing HL-60 leukemia cells

  • Dosaggi

    50 mg/kg, 75 mg/kg

  • Somministrazione

    Administered via i.p.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14981513/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18430894/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16424036/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17240048/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Senescence induction upon PKCι depletion combined with aurora kinase inhibition. ( a) MCF7 cells were transfected as above to deplete PKCι . Two days after transfection, cells were treated for the indicated time period with 400 n M VX-680. Medium with VX-680 was then removed and fresh medium was added. Cells were stained for SA-b -gal activity 5 days after the start of transfection.* indicates a P value <0.05. ( b) MCF7 cells were treated as above. Five days after transfection, cells were fixed and assessed for the presence of gH2AX foci by immunofluorescence microscopy. (c, d) MCF7 cells were treated with dimethyl sulfoxide (DMSO) control or 400 n M VX-680 for the indicated time periods. Total cell lysates were then analyzed by western blotting for levels of p21 and GAPDH (as loading control). A representative blot is shown in panel c. Quantitation of changes in p21 levels (normalized to vehicle-treated controls) is shown in panel d. The data shown are the means ±s.e. of three independent experiments.</p>

Dati da [ Oncogene , 2012 , 31, 3584-96 ]

<p>Senescence induction upon PKCι depletion combined with aurora kinase inhibition in glioblastoma cells. (a, b) U87MG cells were transfected as above to deplete PKCι. Two days after transfection, cells were treated for 72 ( a)or24h (b) with 400 nM VX-680. Medium with VX-680 was then removed and fresh medium was added. Cells were stained for SA-b-gal activity 5 days after the start of transfection. * indicates a P value <0.05. (c) U87MG cells were treated as described in panel a above. Five days after transfection, cells were fixed and assessed for the presence of gH2AX foci by immunofluorescence microscopy. (d) U87MG cells were treated with the dimethyl sulfoxide (DMSO) control or 400 n M VX-680 for the indicated time periods. Total cell lysates were then analyzed by western blotting for levels of p21. The bar graph shows quantitation of p21 levels (normalized to vehicle-treated controls) from three independent experiments. A representative blot is also shown, with lanes aligned to correspond to the labels on the graph.</p>

Dati da [ Oncogene , 2012 , 31, 3584-96 ]

<p>MTT assay reveals a dose-dependent decrease in cell viability in mouse derived brainstem glioma cells treated with VX-680 ( P < 0.001) after 72 h of treatment. The error bars represent the standard deviation. Propidium iodide based cell sorting of mouse derived brainstem glioma cells after 72 h treatment with 5 μM reversine or 100 nM VX-680 respectively reveals increased cell populations with 4N and 8N DNA content as compared to vehicle control.</p>

Dati da [ Brain Pathol , 2012 , 23, 244-53 ]

<p>Treatment of mouse derived brainstem glioma cells for 72 h with 5 μM reversine or 100 nM VX-680 increases cell size compared with vehicle-treated control and leads to irregular-shaped nuclei and micronuclei (F–H). Images F–H represent immunofluorescent staining for GFAP (green) with DAPI counter-stain (blue) and were taken at 400 ×magnification.</p>

Dati da [ Brain Pathol , 2012 , 23, 244-53 ]

Sellecks Tozasertib (VX-680) È stato citato da 139 Pubblicazioni

A patient-derived T cell lymphoma biorepository uncovers pathogenetic mechanisms and host-related therapeutic vulnerabilities [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00102-8] PubMed: 40147445
Overcoming MET-targeted drug resistance in MET-amplified lung cancer by aurora kinase B inhibition [ Biochim Biophys Acta Mol Cell Res, 2025, 1872(7):120001] PubMed: 40499687
Hedgehog signalling is involved in acquired resistance to KRASG12C inhibitors in lung cancer cells [ Cell Death Dis, 2024, 15(1):56] PubMed: 38225225
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739] PubMed: 39276350
The molecular basis of Abelson kinase regulation by its αI-helix [ Elife, 2024, 12RP92324] PubMed: 38588001
Tozasertib activates anti-tumor immunity through decreasing regulatory T cells in melanoma [ Neoplasia, 2024, 48:100966] PubMed: 38237304
Machine learning based androgen receptor regulatory gene-related random forest survival model for precise treatment decision in prostate cancer [ Heliyon, 2024, 10(17):e37256] PubMed: 39296076
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604] PubMed: 38757760
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505] PubMed: 37845213
Mitotic Dysregulation at Tumor Initiation Creates a Therapeutic Vulnerability to Combination Anti-Mitotic and Pro-Apoptotic Agents for MYCN-Driven Neuroblastoma [ Int J Mol Sci, 2023, 10.3390/ijms242115571] PubMed: 37958555

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