Temsirolimus (CCI-779)

N. catalogoS1044 Lotto:S104451

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Dati tecnici

Formula

C56H87NO16
Peso molecolare 1030.29 Numero CAS 162635-04-3
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (97.06 mM)
Ethanol 100 mg/mL (97.06 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Temsirolimus è un inibitore specifico di mTOR con un'IC50 di 1,76 μM in un saggio senza cellule. Temsirolimus induce Autophagy e Apoptosis.
Target
mTOR
(Cell-free assay)
1.76 μM
In vitro In assenza di FKBP12, Temsirolimus inibisce potentemente l'attività della chinasi mTOR con una IC50 di 1,76 μM, simile a quella della rapamicina con una IC50 di 1,74 μM. Il trattamento con questo composto a concentrazioni nanomolari (da 10 nM a <5 μM) mostra un'attività antiproliferativa modesta e selettiva tramite un meccanismo dipendente da FKBP12, ma può inibire completamente la proliferazione di un ampio pannello di cellule tumorali a basse concentrazioni micromolari (5-15 μM), coinvolgendo la soppressione della segnalazione mTOR indipendente da FKBP12. Questo trattamento chimico a concentrazioni micromolari ma non nanomolari (20 μM) provoca un marcato declino della sintesi proteica globale e il disassemblaggio dei poliribosomi, accompagnato da un rapido aumento della fosforilazione del fattore di allungamento della traduzione eEF2 e del fattore di iniziazione della traduzione eIF2A. Inibisce la fosforilazione della proteina ribosomiale S6, più potentemente nelle cellule DU145 PTEN-positive rispetto alle cellule PC-3 PTEN-negative, e inibisce la crescita cellulare e la sopravvivenza clonogenica di entrambe le cellule in modo concentrazione-dipendente. Questo composto (100 ng/mL) inibisce potentemente la proliferazione e induce apoptosis nelle cellule primarie di leucemia linfoblastica acuta (ALL) umana.
In vivo Nei modelli di xenotrapianto NOD/SCID con ALL umana, il trattamento con Temsirolimus a 10 mg/kg/die produce una diminuzione dei blasti del sangue periferico e della splenomegalia . La somministrazione di questo composto (20 mg/kg i.p. 5 giorni/settimana) ritarda significativamente la crescita degli xenotrapianti DAOY del 160% dopo 1 settimana e del 240% dopo 2 settimane, rispetto ai controlli. Una singola dose elevata di questa sostanza chimica (100 mg/kg i.p) induce una regressione del 37% del volume tumorale entro 1 settimana. Il trattamento con questo composto per 2 settimane ritarda anche la crescita degli xenotrapianti U251 resistenti alla rapamicina del 148%. L'inibizione di mTOR da parte di questo agente migliora le prestazioni in quattro diversi compiti comportamentali e diminuisce la formazione di aggregati in un modello murino della malattia di Huntington. La somministrazione di questo composto induce risposte antitumorali significative e dose-dipendenti contro la crescita sottocutanea degli xenotrapianti 8226, OPM-2 e U266 con ED50 di 20 mg/kg e 2 mg/kg per 8226 e OPM-2, rispettivamente, che sono associate a inibizione della proliferazione e dell'angiogenesi, induzione di apoptosis e riduzione delle dimensioni delle cellule tumorali.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio in vitro dell'attività catalitica di mTOR

    I costrutti di DNA di mTOR umano wild-type marcati con Flag (Flag-mTOR) vengono trasfettati transitoriamente nelle cellule HEK293. L'estrazione e la purificazione delle proteine di Flag-mTOR vengono eseguite 48 ore dopo. I saggi in vitro della chinasi di Flag-mTOR purificato in presenza di varie concentrazioni di Temsirolimus senza FKBP12 vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti e rilevati mediante saggio immunofluorescente a lantioidi con dissociazione migliorata (DELFIA) utilizzando His6-S6K1 come substrato. Gli enzimi vengono prima diluiti nel tampone del saggio chinasi (10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl2, 0,5 mM DTT, 0,25 μM microcistina LR e 100 μg/mL BSA). In ciascun pozzetto, 12 μL dell'enzima diluito vengono mescolati brevemente con 0,5 μL di questo composto. La reazione chinasi viene avviata aggiungendo 12,5 μL di tampone del saggio chinasi contenente ATP e His6-S6K per ottenere un volume di reazione finale di 25 μL contenente 800 ng/mL di FLAG-mTOR, 100 μM di ATP e 1,25 μM di His6-S6K. La piastra di reazione viene incubata per 2 ore (lineare a 1-6 ore) a temperatura ambiente con delicata agitazione e quindi terminata aggiungendo 25 μL di tampone di arresto (20 mM Hepes (pH 7,4), 20 mM EDTA e 20 mM EGTA). La rilevazione DELFIA del His6-S6K fosforilato (Thr-389) viene eseguita a temperatura ambiente utilizzando un anticorpo monoclonale anti-P(T389)-p70S6K marcato con Europio-N1-ITC (Eu) (10,4 Eu per anticorpo). 45 μL della miscela di reazione chinasi terminata vengono trasferiti in una piastra MaxiSorp contenente 55 μL di PBS. Il His6-S6K viene lasciato attaccare per 2 ore, dopodiché i pozzetti vengono aspirati e lavati una volta con PBS. Vengono aggiunti 100 μL di tampone DELFIA con 40 ng/mL di anticorpo Eu-P(T389)-S6K. Il legame dell'anticorpo prosegue per 1 ora con delicata agitazione. I pozzetti vengono quindi aspirati e lavati quattro volte con PBS contenente 0,05% di Tween 20 (PBST). Vengono aggiunti 100 μL di soluzione di potenziamento DELFIA a ciascun pozzetto e le piastre vengono lette in un lettore di piastre modello PerkinElmer Victor.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, and PC3-MM2

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~20 μM

  • Tempo di incubazione

    72 hours

  • Metodo

    Cells are exposed to various concentrations of Temsirolimus for 72 hours. After treatment, viable cell densities are determined by MTS dye conversion using CellTiter AQ assay kit.
Studio sugli animali:

[4]
  • Modelli animali

    Female athymic nude mice injected s.c. with DAOY, or U251 cells

  • Dosaggi

    20 mg/kg

  • Somministrazione

    Injection daily 5 times per week

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18413763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15805283/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16195324/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11245461/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146184/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15304393/

Convalida del prodotto da parte del cliente

mTOR inhibitors attenuate ganetespib-driven elevation of HSPs in multiple tumor cell types. A375 melanoma cells were treated with vehicle, ganetespib (25 nmol/L), BEZ235 (500 nmol/L), or temsirolimus (500 nmol/L), either alone or in combination, for 24 hours. The levels of HSP90α, HSP70, HSP27, and GAPDH were determined by immunoblotting.

Dati da [ Mol Cancer Res , 2014 , 12, 703-13 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered 25 mg/kg erlotinib once daily for 4 days or 50 mg/kg temsirolimus once from day 8. Four hours after final erlotinib administration, tumors were harvested, and the relative levels of proteins in the tumor lysates were determined by western blotting.

Dati da [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered as described in Figure. Four hours after final administration of erlotinib, tumors were harvested, and tumor cell angiogenesis (CD31) were determined by immunohistochemistry.

Dati da [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

<p>Breast cancer cells were pretreated with 100ng/ml EGF for 15 min and then treated with the indicated concentrations of Temsirolimus for 24 hours.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Temsirolimus (CCI-779) È stato citato da 108 Pubblicazioni

Haploinsufficiency of miR-143 and miR-145 reveal targetable dependencies in resistant del(5q) myelodysplastic neoplasm [ Leukemia, 2025, 39(4):917-928] PubMed: 40000845
Multi-layer stratified oncology platform utilizing transcriptomics, prostate cancer organoids, and modeling of drug response [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):290] PubMed: 41094672
PI3K/AKT signaling mediates stress-inducible amyloid formation through c-Myc [ Cell Rep, 2025, 44(5):115617] PubMed: 40272983
Lactate shuttle between cytotrophoblast and syncytiotrophoblast in the placenta enhances ferroptosis resistance and maintains placental homeostasis: implications for early pregnancy loss [ Cell Commun Signal, 2025, 23(1):438] PubMed: 41088442
Molecular control of PDPNhi macrophage subset induction by ADAP as a host defense in sepsis [ JCI Insight, 2025, e186456] PubMed: 39903516
A high-throughput screening platform to identify MYCN expression inhibitors for liver cancer therapy [ Front Oncol, 2025, 15:1486671] PubMed: 40027135
Single-Molecule-Based, Label-Free Monitoring of Molecular Glue Efficacies for Promoting Protein-Protein Interactions Using YaxAB Nanopores [ ACS Nano, 2024, 18(45):31451-31465] PubMed: 39482865
The mTOR pathway controls phosphorylation of BRAF at T401 [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):428] PubMed: 39223665
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Enzymatic depletion of circulating glutamine is immunosuppressive in cancers [ iScience, 2024, 27(6):109817] PubMed: 38770139

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