TW-37

TW-37 mira al solco di legame BH3 in Bcl-2 dove si legano le proteine pro-apoptotiche Bcl-2, e mostra una maggiore affinità e selettività per Bcl-2 e Mcl-1 rispetto a Bcl-xL con valori di Ki di 0,29 μM, 0,26 μM e 1,11 μM, rispettivamente. [1] In vitro, questo composto mostra un significativo effetto anti-proliferativo e pro-apoptotico in una linea cellulare di linfoma WSU-DLCL2 chemio-resistente de novo e in cellule primarie ottenute da un paziente con linfoma senza effetti sui linfociti del sangue periferico normali. [1] Esibisce l'effetto inibitorio sia sulla crescita cellulare che sulla morte cellulare in cellule endoteliali con una IC50 di circa 1,8 μM senza effetto sui fibroblasti esposti allo stesso intervallo di concentrazione delle cellule endoteliali. Inoltre, questa sostanza chimica mostra anche effetti anti-proliferazione nelle linee cellulari tumorali MCF-7, LNCaP e SLK con lo stesso o inferiore intervallo di concentrazione rispetto a quelli richiesti per inibire la crescita delle cellule endoteliali. [2]

TW-37 mostra una dose massima tollerata (MTD) di 40 mg/kg per tre iniezioni e.v. in topi con immunodeficienza combinata grave (SCID) quando somministrato da solo, e potenzia l'effetto inibitorio sul tumore del regime CHOP. [1] Questo composto, somministrato per via e.v., produce l'effetto antiangiogenico diminuendo la densità dei microvasi umani funzionali nel modello murino SCID di angiogenesi umana. [2] La combinazione di questa sostanza chimica e degli inibitori di MEK blocca sinergicamente la crescita delle cellule di melanoma nei topi mediante una significativa riduzione del volume e della massa tumorale. [3]

• Saggio di legame basato sulla polarizzazione della fluorescenza per le proteine ricombinanti Bcl-2, Bcl-XL e Mcl-1

  Per questo saggio, vengono impiegati il peptide BH3 di 21 residui QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR derivato da Bid marcato con FAM-Bid e le proteine ricombinanti derivate da Bcl-2 umana, Bcl-X L e Mcl-1. Si determina che FAM-Bid ha una K_i di 11 nM per la proteina Bcl-2, 25 nM per la proteina Bcl-XL e 5,7 nM per la proteina Mcl-1. Il saggio di legame competitivo per Bcl-XL è lo stesso di quello per Bcl-2 con le seguenti eccezioni: 30 nM di proteina Bcl-XL e 2,5 nM di peptide FAM-Bid nel seguente tampone di saggio [50 mM Tris-Bis (pH 7.4) e 0,01% di gamma-globulina bovina].

• Linee cellulari

  HDMECs

• Concentrazioni

  0 - 100 μM

• Tempo di incubazione

  96 hours

• Metodo

  The sulforhodamine B (SRB) cytotoxicity assay is used as described. Briefly, optimal cell density for cytotoxicity assay is determined by growth curve analysis. HDMECs are seeded in a 96-well plate and allowed to adhere overnight. Drug or control is diluted in EGM2-MV and layered onto cells, which are allowed to incubate for times as indicated in the figures. Alternatively, HDMECs are coincubated with TW37 and 0 to 100 ng/mL recombinant human VEGF (rhVEGF)165 or 0 to 100 ng/mL recombinant human CXCL8. Cells are fixed on the plates by addition of cold trichloroacetic acid (10% final concentration) and incubation for 1 hour at 4 °C. Cellular protein is stained by addition of 0.4% SRB in 1% acetic acid and incubation at room temperature for 30 minutes. Unbound SRB is removed by washing with 1% acetic acid and the plates are air dried. Bound SRB is resolubilized in 10 mM unbuffered Tris-base and absorbance is determined on a microplate reader at 560 nm. Test results are normalized against initial plating density and drug-free controls. Data are obtained from triplicate wells per condition and are representative of at least three independent experiments

• Modelli animali

  Athymic NCr-nu/nu mice bearing SK-Mel-147 melanoma xenografts

• Dosaggi

  ~40 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.v. or i.p.