SRT1720 HCl

Il rapporto di attivazione massimo di SRT1720 rispetto agli omologhi sirtuinici più vicini, SIRT2 (EC1.5 = 37 μM) e SIRT3 (EC1.5 > 300 μM) è fino al 781%. SRT1720 si lega al complesso enzima-peptide substrato SIRT1 in un sito allosterico ammino-terminale al dominio catalitico e abbassa la costante di Michaelis per i substrati acetilati. SRT1720 potrebbe ridurre i livelli di glucosio post-prandiale. SRT1720 non ha effetto sulla glicemia a digiuno nei topi alimentati con mangime standard, rivelando che l'attivazione farmacologica di SIRT1 è improbabile che induca ipoglicemia. SRT1720 riduce significativamente l'iperinsulinemia dopo 4 settimane, normalizzando parzialmente i livelli elevati di insulina. Il trattamento con SRT1720 aumenta la capacità mitocondriale del 15% nel muscolo gastrocnemio, misurata dall'attività della citrato sintasi. [1] Concentrazioni più elevate di SRT1720 (15 μM) inducono una modesta (10-20%) diminuzione della vitalità delle cellule normali. SRT1720 inibisce anche significativamente la migrazione delle cellule MM dipendente dal VEGF. [2]

Nei topi DIO, SRT1720 mima molti degli effetti osservati dopo la restrizione calorica, inclusa una migliore sensibilità all'insulina, livelli normalizzati di glucosio e insulina e una maggiore capacità mitocondriale. Inoltre, nei topi obesi indotti dalla dieta e geneticamente obesi, SRT1720 migliora la sensibilità all'insulina, abbassa il glucosio plasmatico e aumenta la capacità mitocondriale. Pertanto, SRT1720 è un nuovo agente terapeutico promettente per il trattamento delle malattie dell'invecchiamento come il diabete di tipo 2. In linea con una migliore tolleranza al glucosio, il tasso di infusione di glucosio richiesto per mantenere l'euglicemia è circa il 35% più alto nei ratti fa/fa trattati con SRT1720, e il tasso totale di smaltimento del glucosio è aumentato di circa il 20%. [1] SRT1720 previene anche la crescita tumorale del mieloma multiplo. 

• Saggio di polarizzazione della fluorescenza SIRT1

  Nel saggio FP SIRT1, l'attività SIRT1 viene monitorata utilizzando un peptide di 20 aminoacidi (Ac-Glu-Glu-Lys(biotina)-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Ser-His-Ser-Lys(Ac)-Nle-Ser-Thr-Glu-Gly–Lys(MR121 o Tamra)-Glu-Glu-NH₂) derivato dalla sequenza di p53. Il peptide è legato N-terminalmente alla biotina e modificato C-terminalmente con un tag fluorescente. La reazione per monitorare l'attività enzimatica è un saggio enzimatico accoppiato in cui la prima reazione è la reazione di deacetilazione catalizzata da SIRT1 e la seconda reazione è la scissione da parte della tripsina al residuo di lisina appena esposto. La reazione viene interrotta e viene aggiunta streptavidina per accentuare le differenze di massa tra substrato e prodotto. La sensibilità del saggio FP consente l'identificazione di SRT1720. Le condizioni della reazione di polarizzazione della fluorescenza sono le seguenti: 0,5 μM di substrato peptidico, 150 μM di βNAD⁺, 0-10 nM di SIRT1, 25 mM di Tris-acetato pH 8, 137 mM di Na-Ac, 2,7 mM di K-Ac, 1 mM di Mg-Ac, 0,05% di Tween-20, 0,1% di Pluronic F127, 10 mM di CaCl 2, 5 mM di DTT, 0,025% di BSA e 0,15 mM di nicotinammide. La reazione viene incubata a 37 °C e interrotta con l'aggiunta di nicotinammide, e viene aggiunta tripsina per scindere il substrato deacetilato. Questa reazione viene incubata a 37 °C in presenza di 1 μM di streptavidina. La polarizzazione fluorescente viene determinata a lunghezze d'onda di eccitazione (650 nm) e emissione (680 nm).

• Linee cellulari

  Human vascular endothelial cells (HUVECs)

• Concentrazioni

  5 μM

• Tempo di incubazione

  2 hours

• Metodo

  Transwell Insert Assays are utilized to measure migration. In vitro angiogenesis is assessed by Matrigel capillary-like tube structure formation assay. For endothelial tube formation assay, human vascular endothelial cells (HUVECs) are obtained from Clonetics and maintained in endothelial cell growth medium-2 containing 5% FBS. After three passages, HUVEC cell viability is measured with the trypan blue exclusion assay, and <5% of cell death is observed with SRT1720 treatment.

• Modelli animali

  Chase-SCID mice with MM.1S cells

• Dosaggi

  200 mg/kg

• Somministrazione

  Orally