NSC 74859 (S3I-201)

NSC 74859 (S3I-201) inibisce la crescita e induce l'apoptosi preferenzialmente nelle cellule tumorali che contengono Stat3 persistentemente attivata, inibendo la formazione del complesso Stat3·Stat3 e le attività di legame al DNA e trascrizionali di Stat3. Inoltre, inibisce anche l'espressione dei geni regolati da Stat3 che codificano per ciclina D1, Bcl-xL e survivina. [1] Questo composto inibisce le linee cellulari di carcinoma mammario MDA-MB-435, MDA-MB-453 e MDA-MB-231 con IC50 di 100 μM. Inoltre, le cellule con segnalazione TGF-β compromessa sono quattro volte più sensibili a S3I-201. [2] Uno studio recente dimostra che potenzia l'effetto antiproliferativo nelle cellule HepG2 e Huh-7 tramite la via di segnalazione STAT3. [3]

NSC 74859 (S3I-201) (5 mg/kg, i.v. ogni 2 o ogni 3 giorni) mostra l'efficacia antitumorale in modelli murini con xenotrapianti di tumori mammari umani che ospitano Stat3 costitutivamente attiva. [1] Questo trattamento con il composto riduce la replicazione del virus Varicella-zoster (VZV) sulla base del segnale di bioluminescenza e del numero di xenotrapianti cutanei positivi rispetto ai topi trattati con DMSO, inibendo la fosforilazione di STAT3. [4]

• Saggio di legame al DNA di Stat3 in vitro e analisi EMSA

  In breve, 100 μL di biotinil-e-Ac-EPQpYEEIEL-OH (in 50 mM Tris/150 mM NaCl, pH 7.5) vengono aggiunti a ciascun pozzetto di piastre per microtitolazione a 96 pozzetti rivestite con streptavidina e incubati con agitazione a 4 °C durante la notte. Le piastre vengono quindi risciacquate con PBS/Tween 20 e quindi due volte con 200 μL di BSA-T-PBS (0.2% BSA/0.1% Tween 20/PBS). Quindi, 50 μL di proteina di fusione Lck-SH2-GST (6.4 ng/ml in BSA-T-PBS) vengono aggiunti a ciascun pozzetto della piastra a 96 pozzetti in presenza e assenza di 50 μL di NSC 74859 (S3I-201) (per concentrazioni finali di 30 e 100 mM), e la piastra viene agitata a temperatura ambiente per 4 ore. Dopo aver rimosso le soluzioni, ciascun pozzetto viene risciacquato quattro volte con BSA-T-PBS (200 μL), e 100 μL di anticorpo policlonale di coniglio anti-GST (100 ng/mL in BSA-T-PBS) vengono aggiunti a ciascun pozzetto e incubati a 4 °C durante la notte. Dopo il lavaggio con BSA-T-PBS, 100 μL di anticorpo di topo anti-coniglio coniugato con perossidasi di rafano BSA-T-PBS da 200 ng/mL vengono aggiunti a ciascun pozzetto e incubati per 45 minuti a temperatura ambiente. Dopo quattro passaggi di lavaggio con BSA-T-PBS e tre passaggi di lavaggio con PBS-T, 100 μL di substrato perossidasico vengono aggiunti a ciascun pozzetto e incubati per 5-15 minuti. La reazione perossidasica viene interrotta aggiungendo 100 μL di soluzione di acido solforico 1 M, e l'assorbanza viene letta a 450 nm con un lettore di piastre ELISA.

• Linee cellulari

  MDA-MB-435, MDA-MB-453 and MDA-MB-231 cells lines

• Concentrazioni

  ~ 250 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  The MTT assay is based on the conversion of the yellow tetrazolium salt MTT to purple formazan crystals by metabolically active cells. The MTT assay provides a quantitative determination of viable cells. Cells are seeded in 96-well microplates in complete culture medium in the absence or presence of increasing serial dosages of NSC 74859 (S3I-201) as indicated. At 72 hours after culture, the number of viable cells is measured by adding 100 μL/well of 2 mg/mL MTT solution. After 2 hours, the medium is removed. The absorbance is read at 590 nm with an enzyme-linked immunosorbent assay reader. Each treatment point is performed in 10 wells or sextuplicate.

• Modelli animali

  Human breast cancer MDA-MB-231 cells are injected s.c. into the left flank of athymic nu/nu mice.

• Dosaggi

  ≤5 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.v.