R406

R406 è un potente inibitore dell'attivazione della segnalazione del recettore Fc mediata da immunoglobulina E (IgE) e IgG. Questo composto inibisce la produzione e il rilascio indotti da anti-IgE di LTC4 e di citochine e chemochine, inclusi TNFα, IL-8 e GM-CSF. Inibisce la fosforilazione del linker del substrato di Syk per l'attivazione delle cellule T nei mastociti e della proteina linker delle cellule B/SLP65 nelle cellule B. Questa sostanza chimica si lega alla tasca di legame dell'ATP di Syk e inibisce la sua attività chinasica come inibitore competitivo dell'ATP con K_i di 30 nM. Blocca l'attivazione di monociti/macrofagi e neutrofili mediata da FcR Syk-dipendente e l'attivazione di linfociti B mediata da Bcr. [1]

Questo composto induce significativamente l'apoptosi delle cellule di leucemia linfatica cronica (LLC) in coculture di cellule nutrici e blocca la secrezione di CCL3 e CCL4 da parte delle cellule LLC in risposta all'attivazione del recettore dell'antigene delle cellule B (Bcr). [2]

È un potente inibitore della segnalazione e delle funzioni piastriniche avviate dal cross-linking di FcγRIIA da anticorpi specifici o da sieri di pazienti con HIT. [3]

R406 riduce la reazione di Arthus passiva inversa cutanea di circa l'86% a 5 mg/kg nei topi trattati profilatticamente. Questo composto mostra anche efficacia nell'inibire l'infiammazione della zampa in modelli murini di artrite indotta da anticorpi. [1]

Non influisce negativamente sulla funzione dei macrofagi o dei neutrofili nelle risposte immunitarie innate e ha una tossicità immunitaria funzionale minima nonostante il suo effetto linfocitopenico. [4]

• Saggio chinasico di polarizzazione di fluorescenza in vitro

  R406 viene diluito in serie in DMSO e quindi diluito all'1% di DMSO in tampone chinasico (20 mM HEPES, pH 7,4, 5 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM DTT, 0,1 mg/mL BGG acetilato). ATP e substrato in tampone chinasico vengono aggiunti a temperatura ambiente, risultando in una concentrazione finale di DMSO dello 0,2%. Le reazioni chinasiche vengono eseguite in un volume finale di 20 µL contenente 5 mM di substrato peptidico HS1, 4 mM di ATP e avviate con l'aggiunta di 0,125 ng di Syk in tampone chinasico. La reazione è lasciata procedere per 40 minuti a temperatura ambiente. La reazione viene interrotta con l'aggiunta di 20 µL di miscela di quenching PTK contenente EDTA/anticorpo anti-fosfotirosina (1X finale)/tracciante fosfopeptidico fluorescente (0,5X finale) diluita in tampone di diluizione FP. La piastra viene incubata per 30 minuti al buio a temperatura ambiente e quindi letta su un lettore di piastre a polarizzazione di fluorescenza Polarion. I dati vengono convertiti in quantità di fosfopeptide presente utilizzando una curva di calibrazione generata per competizione con il competitore fosfopeptidico fornito nel kit di saggio tirosina chinasi. Per la determinazione dell'IC50, questo composto viene testato a undici concentrazioni e l'adattamento della curva viene eseguito mediante analisi di regressione non lineare.

• Modelli animali

  Arthritis is induced in C57BL/6 mice by intraperitoneal injection of 150 μL of pooled sera from adult K/BxN mice.

• Dosaggi

  1 or 5 mg/kg

• Somministrazione

  Administered orally