Pelitinib (EKB-569)

N. catalogoS1392 Lotto:S139203

Stampa

Dati tecnici

Formula

C24H23ClFN5O2
Peso molecolare 467.92 Numero CAS 257933-82-7
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 13 mg/mL (27.78 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Pelitinib (EKB-569) è un potente inibitore irreversibile di EGFR con una IC50 di 38,5 nM. Questo composto inibisce anche leggermente Src, MEK/ERK ed ErbB2 con IC50 rispettive di 282 nM, 800 nM e 1255 nM. Fase 2.
Target
EGFR Src MEK/ERK ErbB2 Raf
38.5 nM 282 nM 800 nM 1.255 μM 3.353 μM
In vitro Pelitinib (EKB-569) mostra un'attività inibitoria molto più elevata contro EGFR, rispetto al c-erbB-2 strettamente correlato, così come altre chinasi come Src, Cdk4, c-Met, Raf e MEK/ERK, con IC50 che vanno da 282 nM per Src a >20 μM per Cdk4. Coerentemente, il trattamento con questo composto inibisce significativamente l'autofosforilazione di EGFR ma non di c-Met nelle cellule A431. Inibisce potentemente la proliferazione dei cheratinociti umani normali (NHEK), così come delle cellule tumorali A431 e MDA-468 con IC50 di 61 nM, 125 nM e 260 nM, rispettivamente, mentre mostra poca attività contro le cellule MCF-7 con IC50 di 3,6 μM. Questa sostanza chimica inibisce la fosforilazione di EGFR indotta da EGF nelle cellule A431 e NHEK con IC50 di 20-80 nM, così come la fosforilazione di STAT3 con IC50 di 30-70 nM. A 75-500 nM, inibisce anche specificamente l'attivazione di AKT ed ERK1/2, senza influenzare la via NF-κB. Nelle cellule NHEK, questo composto inibisce anche potentemente l'attivazione di EGFR mediata da TGF-α con IC50 di 56 nM, così come l'attivazione di STAT3 ed ERK1/2 con IC50 rispettive di 60 nM e 62 nM.
In vivo Una singola dose orale di 10 mg/kg di Pelitinib (EKB-569) inibisce potentemente la fosforilazione di EGFR negli xenotrapianti A431 con EGFR sovraespresso, del 90% entro 1 ora e di >50% dopo 24 ore. L'amministrazione di questo composto a 20 mg/kg/die inibisce la tumorigenesi nei topi APCMin/+ dell'87%, equivalente all'effetto di 2 dosi di EKI-785 (40 mg/kg/die), coerentemente con una maggiore potenza in vivo. Questa sostanza chimica inibisce selettivamente la segnalazione di EGFR nelle cellule epiteliali delle vie aeree in vivo. Nel modello murino di rimodellamento epiteliale delle vie aeree che è inducibile da infezione virale e presenta un passaggio ritardato ma permanente alla metaplasia delle cellule caliciformi, il trattamento con questo composto a 20 mg/kg/die corregge tutti e 3 gli aspetti del rimodellamento epiteliale, bloccando completamente l'aumento delle cellule ciliate e la diminuzione delle cellule di Clara, e inibendo significativamente la metaplasia delle cellule caliciformi.
Caratteristiche Una versione migliorata di EKI-785.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Autofosforilazione di EGFR nelle cellule

    Per gli esperimenti che utilizzano cellule in coltura, le cellule A431 vengono trattate con varie concentrazioni di Pelitinib (EKB-569) per 2,75 ore prima della co-incubazione con 100 ng/mL di EGF per 0,25 ore. Le cellule vengono lavate due volte con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) fredda prima di aggiungerle al tampone di lisi (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM acido etilendiamminotetraacetico (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% desossicolato di sodio, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatina A, 10 mg/mL leupeptina, 20 KIU/mL aprotinina, 2 mM ortovanadato di sodio e 100 mM fluoruro di sodio) per 20 minuti su ghiaccio, prima dell'immunoprecipitazione e dell'immunoblotting SDS-PAGE. Per l'immunoprecipitazione, le cellule coltivate vengono poste in tampone di lisi freddo e immediatamente omogeneizzate su ghiaccio con un Polytron con diversi impulsi. L'omogenato viene prima centrifugato a 2500 rpm (20 minuti, 4 °C) e poi di nuovo a 14.000 rpm in una microcentrifuga (10 minuti, 4 °C). I surnatanti (1000 μg di proteina) vengono incubati per 2 ore a 4 °C con 15 mL di anticorpo policlonale anti-EGFR. Dopo 2 ore, vengono aggiunti 50 μL di perle di agarosio di proteina G plus/proteina A e incubate con rotazione costante per 2 ore a 4 °C. Dopo il lavaggio con tampone di lisi, le perle vengono bollite per 2 minuti nel tampone campione di Laemmli. Le proteine vengono quindi risolte mediante SDS-PAGE, trasferite su membrana di immobilon e sondate durante la notte con un anticorpo anti-fosfotirosina coniugato con perossidasi di rafano (HRP). Le membrane vengono sviluppate utilizzando il reagente ECL. La proteina EGFR totale viene determinata spogliando le membrane e ri-sondando con anticorpi specifici del recettore. La quantificazione delle bande viene eseguita mediante densitometria, utilizzando il software ImageQuant con uno scanner a trasmittanza laser Molecular Dynamics.
Saggio cellulare:

[2]
  • Linee cellulari

    NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    5 days

  • Metodo

    Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib (EKB-569) is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)

  • Dosaggi

    10, or 20 mg/kg/day

  • Somministrazione

    Oral gavage

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

Convalida del prodotto da parte del cliente

HBMEC were preincubated with the indicated concentrations of either ErB1/2/4 inhibitor (Pelitinib; EKB-569), and cells were then infected for 4 h with the unencapsulated strain, MC58 siaD. The numbers of adherent (black bars) and invasive (gray bars) bacteria were determined in a gentamicin protection assay. The graphs show the percentages of adhesion and invasion of inhibitor-treated cells, relative to control cells (means 盨D of three independent experiments performed in duplicate). *, P < 0.05.

Dati da [ Infect Immun , 2014 , 82(3), 1243-55 ]

<p>IGF-1 and IL-1β mediated induction of Bcl-2 expression involves EGFR.   (A)  Bcl-2 mRNA levels in AALEBs treated with IGF-1 or IL-1β in the presence or absence of two EGFR tyrosine kinase inhibitors, EKB-569 (1 μM) or PD153035 (1 μM). </p>

Dati da [ J Immunol , 2012 , 188, 4581-4589 ]

Immunofluorescence Assay. PDCD4, GRA3, and overlapping are represented in red, green, and yellow, respectively. Group I TKIs sunitinib and AZD9291 show similar results to that of the negative control with PDCD4 and GRA3 well localized inside the nuclei. Mild disruption of PDCD4 in the nuclei is observed with Group II TKIs gefitinib, erlotinib, and AG1478. Group III TKIs neratinib, afatinib, and pelitinib show comparable changes to that of pyrimethamine 5 μM, with complete disruption of PDCD4 and GRA3, without any localization. The assays were repeated 3 times, and each experiment was performed in triplicate. A representative result is shown (x1,000).

Dati da [ , , Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503 ]

Sellecks Pelitinib (EKB-569) È stato citato da 11 Pubblicazioni

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
EGFR Inhibition Potentiates FGFR Inhibitor Therapy and Overcomes Resistance in FGFR2 Fusion-Positive Cholangiocarcinoma [ Cancer Discov, 2022, 12(5):1378-1395] PubMed: 35420673
The multi-kinase inhibitor afatinib serves as a novel candidate for the treatment of human uveal melanoma [ Cell Oncol (Dordr), 2022, 45(4):601-619] PubMed: 35781872
Biomarker LEPRE1 induces pelitinib-specific drug responsiveness by regulating ABCG2 expression and tumor transition states in human leukemia and lung cancer [ Sci Rep, 2022, 12(1):2928] PubMed: 35190588
A Genome-Scale CRISPR Screen Identifies the ERBB and mTOR Signalling Networks as Key Determinants of Response to PI3K Inhibition in Pancreatic Cancer [ Mol Cancer Ther, 2020, 5;molcanther.1131.2019] PubMed: 32371585
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790] PubMed: 31160710
Suppressors for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2/4 (HER2/4): A New Family of Anti-Toxoplasmic Agents in ARPE-19 Cells [Kim YH Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503] PubMed: 29103264
Sensitivity of Melanoma Cells to EGFR and FGFR Activation but Not Inhibition is Influenced by Oncogenic BRAF and NRAS Mutations. [Garay T, et al. Pathol Oncol Res, 2015, 10.1007/s12253-015-9916-9] PubMed: 25749811
Selective inhibition of human solute carrier transporters by multikinase inhibitors [Johnston RA, et al. Drug Metab Dispos, 2014, 42(11):1851-7] PubMed: 25165131
Role of epidermal growth factor receptor signaling in the interaction of Neisseria meningitidis with endothelial cells [Slanina H et al. Infect Immun, 2014, 82(3):1243-55] PubMed: 24379285

POLITICA DI RESO
La politica di reso incondizionato di Selleck Chemical garantisce ai nostri clienti unesperienza di acquisto online senza problemi. Se non sei in alcun modo soddisfatto del tuo acquisto, puoi restituire qualsiasi articolo entro 7 giorni dalla ricezione. In caso di problemi di qualità del prodotto, sia relativi al protocollo che al prodotto, puoi restituire qualsiasi articolo entro 365 giorni dalla data di acquisto originale. Si prega di seguire le istruzioni seguenti per la restituzione dei prodotti.

SPEDIZIONE E CONSERVAZIONE
I prodotti Selleck vengono trasportati a temperatura ambiente. Se ricevi il prodotto a temperatura ambiente, ti assicuriamo che il Dipartimento di Ispezione Qualità di Selleck ha condotto esperimenti per verificare che la conservazione a temperatura normale per un mese non influirà sullattività biologica dei prodotti in polvere. Dopo la raccolta, conservare il prodotto secondo le indicazioni descritte nella scheda tecnica. La maggior parte dei prodotti Selleck è stabile nelle condizioni raccomandate.

NON PER USO UMANO, DIAGNOSTICO VETERINARIO O TERAPEUTICO.