PLX-4720

N. catalogoS1152 Lotto:S115206

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Dati tecnici

Formula

C17H14ClF2N3O3S
Peso molecolare 413.83 Numero CAS 918505-84-7
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 82 mg/mL (198.14 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione PLX4720 è un inibitore potente e selettivo di B-RafV600E con una IC50 di 13 nM in un saggio senza cellule, ugualmente potente a c-Raf-1 (mutazioni Y340D e Y341D), con una selettività 10 volte maggiore per B-RafV600E rispetto al B-Raf wild-type.
Target
C-Raf-1 (Y340D/Y341D)
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 BRK
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
6.7 nM 13 nM 130 nM 160 nM
In vitro PLX-4720 mostra una selettività >10 volte superiore contro il B-Raf wild type e una selettività >100 volte superiore rispetto ad altre chinasi come Frk, Src, Fak, FGFR e Aurora A con IC50 di 1,3-3,4 μM. Questo composto inibisce significativamente la fosforilazione di ERK in linee cellulari che esprimono B-RafV600E con IC50 di 14-46 nM, ma non nelle cellule con B-Raf wild-type. Inibisce significativamente la crescita di linee cellulari tumorali che esprimono l'oncogene B-RafV600E, come COLO205, A375, WM2664 e COLO829 con GI50 di 0,31 μM, 0,50 μM, 1,5 μM e 1,7 μM, rispettivamente. Inoltre, questo trattamento chimico a 1 μM induce l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi esclusivamente nelle cellule 1205Lu positive per B-RafV600E, ma non nelle cellule C8161 wild-type per B-Raf. Questo trattamento con il composto (10 μM) induce significativamente un'espressione di BIM >14 volte nelle cellule PTEN+, rispetto alle linee cellulari PTEN- (4 volte), fornendo una spiegazione della resistenza delle cellule PTEN- a questa apoptosi indotta da sostanze chimiche.
In vivo La somministrazione orale di PLX-4720 a 20 mg/kg/giorno induce significativi ritardi e regressioni della crescita tumorale in xenotrapianti tumorali COLO205 dipendenti da B-RafV600E, senza evidenti effetti avversi nei topi anche a una dose di 1 g/kg. Questo composto a 100 mg/kg due volte al giorno elimina quasi completamente gli xenotrapianti 1205Lu che esprimono B-RafV600E, mentre non ha attività contro gli xenotrapianti C8161 che esprimono B-Raf wild-type. Gli effetti antitumorali di questo composto correlano con il blocco della via MAPK in quelle cellule che ospitano la mutazione V600E. Questo trattamento chimico a 30 mg/kg/giorno inibisce significativamente la crescita tumorale degli xenotrapianti 8505c di >90% e diminuisce drasticamente le metastasi polmonari distanti.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Attività chinasiche di Raf in vitro

    Le attività chinasiche in vitro del Raf wild type e dei mutanti sono determinate misurando la fosforilazione della proteina MEK biotinilata utilizzando la tecnologia AlphaScreen di Perkin-Elmer. Per ogni enzima (0,1 ng), vengono eseguite reazioni di 20 μL in 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01% Tween-20, 100 nM di proteina biotin-MEK, varie concentrazioni di ATP e concentrazioni crescenti di PLX-4720 a temperatura ambiente. Le reazioni vengono interrotte a 2, 5, 8, 10, 20 e 30 minuti con 5 μL di una soluzione contenente 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA e 0,3% BSA. La soluzione di interruzione include anche l'anticorpo phospho-MEK, perline donatrici rivestite di streptavidina e perline accettrici di proteina A dal kit di rilevazione di proteina A AlphaScreen. L'anticorpo e le perline vengono pre-incubati nella soluzione di interruzione al buio a temperatura ambiente per 30 minuti. La diluizione finale dell'anticorpo è 1/2.000 e la concentrazione finale di ogni perlina è 10 μg/mL. Le piastre del saggio vengono incubate a temperatura ambiente per un'ora e quindi lette su un lettore AlphaQuest di PerkinElmer.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    COLO205, A375, WM2664, COLO829, HT716, SW620, H460, Calu-6, HCT116, SK-MEL2, SK-MEL3, Lovo, H1299, 1205Lu, and C8161 cells

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 mM

  • Tempo di incubazione

    24, 48, and 72 hours

  • Metodo

    Cells are treated with various concentrations PLX-4720 for 24, 48, and 72 hours. Cell proliferation is measured by using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay or MTT assay. For cell cycle analysis, supernatant and cells are collected, pelleted, and fixed with 70% ethanol. Before staining with propidium iodide (10 μg/mL), cells are incubated for 1 hour at 37 °C in 0.5 mg/mL RNase I to rid samples of residual RNA contamination. Samples are then analyzed by using the EPICS XL apparatus. For the assessment of apoptosis, media and cells are harvested and pelleted before staining with annexin-FITC and propidium iodide. Samples are subsequently analyzed by using the EPICS XL apparatus.
Studio sugli animali:[1]
  • Modelli animali

    Female athymic mice (NCr nu/nu) implanted s.c. with COLO205 cells, and SCID mice with 1205Lu or C8161 cells

  • Dosaggi

    5, 20, or 100 mg/kg

  • Somministrazione

    Oral gavage once or twice daily

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18287029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317224/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20498063/

Convalida del prodotto da parte del cliente

Combinatorial knockdown of NF1 and C-RAF abrogates NF1-mediated resistance to B-RAF inhibition at the level of ERK phosphorylation. A375 cells were infected with NF1 shRNA and treated with either DMSO or PLX4720 for 16 h. Cell lysates were analyzed for the indicated proteins.

Dati da [ Cancer Discov , 2013 , 3, 350-62 ]

(D)Melanoma cell lines were treated with 0.5 uM Pi-103 and/or 2 uM PLX4720 for 4 h. Samples were analyzed by Western blotting for the indicated proteins. β-Actin served as a loading control. (E) Melanoma cell lines were treated with a dilution series of Pi-103 either alone or in combination with the BRAFV600E inhibitor PLX4720 at a concentration of 3 uM (D10) or 1 uM (453A0) for 3 d. Total cell numbers were determined with a cell titer blue assay. The Y-axis represents the percentage of living cells.

Dati da [ Genes Dev , 2012 , 26, 1055-69 ]

<p>RAF inhibitors induce dimer formation between KSR and RAF, and activate KSR by CRAF. (A) GDC0879 but not PLX4720 induces BRAF/CRAF dimers. Cells overexpressing myc-CRAF and BRAF were treated with drug for 1 h and CRAF immunoprecipitates were immunoblotted for BRAF and CRAF (epitope tagged with myc). (B) GDC0879 but not PLX4720 enhances KSR/BRAF complexes. KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and BRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted using antibodies to BRAF. (C) Both GDC0879 and PLX4720 induce KSR/CRAF complexes.KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and myc-CRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted for CRAF using myc antibodies. (D and E) Requirement of KSR for drug-induced ERK activation. Lysates fromwild-type and KSR deficient fibroblasts, transfected with RASV12, were treated with the indicated doses of either GDC-0879 (D) or PLX4720 (E) for 1 h. Lysates were immunoblotted for phospho-ERK1 and 2, ERK2, and RASV12. (F) KSR and CRAF cooperate to activate MEK. Cells expressing the indicated constructs were treated with a 50 μM PLX4720 for 2 h before cell lysates were prepared and analyzed for pMEK by immunoblotting. CRAF(TM) refers to the T421M gatekeeper mutant that cannot bind to the drug(4). (G) KSR in vitro kinase reactions. Cells were cotransfected with WT or ATP binding deficient KSR and CRAF and immunoprecipitates prepared after cells were treated with an activating dose of PLX (10 μM) for 1 h. KSR immunoprecipitates were prepared, pretreated with 50 uM PLX4720 to inhibit coprecipitating RAF activity, and then tested for kinase activity using purified MEK. MEK phosphorylation was detected using a pMEK specific antibody.</p>

Dati da [ Proc Natl Acad Sci USA , 2011 , 108, 6067-6072 ]

<p>PTEN predicts for PLX4720-induced apoptosis. A, basal PTEN and phospho-AKT(pAKT; S473, T308) expression in PTENt (WM164, 451Lu, SK-mel-28, WM983A, WM35, WM51) and PTEN (WM239A, WM266-4, WM793, M233, WM9, 1205Lu) melanoma cell lines. B, MTT assay of PTENt (gray)-expressing versus PTEN (black) cell lines. C, PTENt cells are more sensitive than PTEN cells to PLX4720-mediated apoptosis. Cells treated for 48 hours with 3 or 10 μmol/L PLX4720 before being stained for TMRM and Annexin-V. Apoptosis was measured by flow cytometry. Data shows mean SE mean of 3 independent experiments.*, PTENt cohort significantly different from PTEN cohort(P < 0.05).</p>

Dati da [ Cancer Res , 2011 , 71, 2750-2760 ]

Sellecks PLX-4720 È stato citato da 206 Pubblicazioni

Elevated NR2F1 underlies the persistence of invasive disease after treatment of BRAF-mutant melanoma [ J Clin Invest, 2025, 135(18)e178446] PubMed: 40955663
Elevated Transglutaminase-2 in SOX10-Deficient Melanoma Promotes Tumor Onset and Decreases Intratumoral CD4+ T Cells [ Cancer Res, 2025, 10.1158/0008-5472.CAN-24-3267] PubMed: 40742313
PTRF Confers Melanoma-Acquired Drug Resistance Through the Upregulation of EGFR [ Cell Prolif, 2025, e70086.] PubMed: 40745979
A functional comparison of two transplantable syngeneic mouse models of melanoma: B16F0 and YUMM1.7 [ Biol Open, 2025, 14(9)bio062175] PubMed: 40878826
Noncanonical role of Golgi-associated macrophage TAZ in chronic inflammation and tumorigenesis [ Sci Adv, 2025, 11(4):eadq2395] PubMed: 39841821
The ribotoxic stress response drives UV-mediated cell death [ Cell, 2024, 187(14):3652-3670.e40] PubMed: 38843833
Tracking the EMT-like phenotype switching during targeted therapy in melanoma by analyzing extracellular vesicle phenotypes [ Biosens Bioelectron, 2024, 10.1016/j.bios.2023.115819] PubMed: 37952322
Mcl-1 mediates intrinsic resistance to RAF inhibitors in mutant BRAF papillary thyroid carcinoma [ Cell Death Discov, 2024, 10(1):175] PubMed: 38622136
The ERK5 pathway in BRAFV600E melanoma cells plays a role in development of acquired resistance to dabrafenib but not vemurafenib [ FEBS Lett, 2024, 10.1002/1873-3468.14960] PubMed: 38977937
Executioner caspases restrict mitochondrial RNA-driven Type I IFN induction during chemotherapy-induced apoptosis [ Nat Commun, 2023, 14(1):1399] PubMed: 36918588

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