PIK-75 HCl

N. catalogoS1205 Lotto:S120501

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Dati tecnici

Formula

C16H14BrN5O4S.HCl
Peso molecolare 488.74 Numero CAS 372196-77-5
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 98 mg/mL (200.51 mM)
Ethanol 9 mg/mL (18.41 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione PIK-75 HCl è un inibitore di p110α con una IC50 di 5,8 nM (200 volte più potente di p110β), mutanti isoforma-specifici a Ser773, e inibisce anche potentemente la DNA-PK con una IC50 di 2 nM in saggi acellulari.
Target
DNA-PK
(Cell-free assay)		 p110α
(Cell-free assay)		 p110γ
(Cell-free assay)		 p110δ
(Cell-free assay)
2 nM 5.8 nM 76 nM 0.51 μM
In vitro PIK-75 mostra un'impressionante potenza e selettività di isoforma per p110α, mentre i corrispondenti valori di IC50 sono 1300 nM, 76 nM e 510 nM per le altre isoforme di PI3K, p110β, -γ e -δ, rispettivamente. Inoltre, quando si lega a p110α purificata, PIK-75 è un inibitore non competitivo rispetto all'ATP con un Ki di 36 nM e competitivo rispetto al substrato PI con un Ki di 2,3 nM. PIK-75 mostra anche una potente inibizione della DNA-PK. PIK-75 (1 μM) riduce la sopravvivenza cellulare diminuendo significativamente l'attività mitocondriale nelle cellule muscolari lisce delle vie aeree (ASM) non asmatiche non stimolate, nelle cellule ASM asmatiche e nei fibroblasti polmonari. Mentre nelle cellule ASM stimolate dal TGFβ, PIK75 diminuisce l'attività mitocondriale solo nelle cellule asmatiche senza effetti nelle cellule non asmatiche. Uno studio recente mostra che PIK-75 (10 nM) inibisce l'espressione dell'mRNA di CD38 indotta dal TNF-α e attenua significativamente l'attività della ADP-ribosil ciclasi indotta dal TNF-α nelle cellule muscolari lisce delle vie aeree umane.
In vivo Nel modello tumorale ErbB3WT, PIK-75 riduce la risposta chemiotattica in vitro a HRGβ1 e abbassa i livelli di pAkt del 40%. Inoltre, PIK-75 riduce significativamente la motilità delle cellule tumorali e l'invasione in vivo nei tumori primari ErbB3WT. Nei topi maschi CD1, PIK-75 porta a gravi alterazioni nel test di tolleranza all'insulina (ITT) e nel test di tolleranza al glucosio (GTT), e un aumento della produzione di glucosio durante un test di tolleranza al piruvato (PTT).
Caratteristiche Inibitore di PI3K e DNA-PK.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggi di inibizione

    L'inibitore PI3K PIK-75 viene sciolto a 10 mM in dimetilsolfossido e conservato a -20°C fino all'uso. L'attività enzimatica di PI3K è determinata in 50 μL di 20 mM HEPES, pH 7.5, e 5 mM MgCl2 contenenti 180 μM di fosfatidilinositolo, con la reazione avviata dall'aggiunta di 100 μM di ATP (contenente 2,5 μCi di [γ-32P]ATP). Dopo un'incubazione di 30 minuti a temperatura ambiente, la reazione enzimatica viene interrotta dall'aggiunta di 50 μL di HCl 1 M. I fosfolipidi vengono quindi estratti con 100 μL di cloroformio/metanolo [1:1 (v/v)] e 250 μL di KCl 2 M, seguiti da conteggio in scintillazione liquida. Gli inibitori vengono diluiti in dimetilsolfossido al 20% (v/v) per generare una curva di concentrazione rispetto all'inibizione dell'attività enzimatica, che viene quindi analizzata utilizzando Prism versione 5.00 per Windows per calcolare l'IC50. Per l'analisi cinetica, viene utilizzato un saggio luminescente che misura il consumo di ATP. L'attività enzimatica di PI3K è determinata in 50 μL di 20 mM HEPES, pH 7.5, e 5 mM MgCl2 con PI e ATP a varie concentrazioni. Dopo un'incubazione di 60 minuti a temperatura ambiente, la reazione viene interrotta dall'aggiunta di 50 μL di Kinase-Glo seguita da un'ulteriore incubazione di 15 minuti. La luminescenza viene quindi letta utilizzando un lettore di piastre Fluostar. I risultati vengono analizzati utilizzando Prism.

Saggio cellulare:[3]
  • Linee cellulari

    A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3 and HS852 cells

  • Concentrazioni

    0-10 μM

  • Tempo di incubazione

    48 hours

  • Metodo

    Mitochondrial activity is assessed after stimulation with TGFβ with or without inhibitors for 48 hours using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT) assay. Harvested washed cells are resuspended in DMEM-lO% FCS and aliquoted (500 μL) into 24-well cluster plates prior to serial dilution (1:2) in duplicates. To each well, 100 μL of an appropriate MTT concentration (dissolved in PBS and filtered through a 0.2 μm filter before use to remove any blue formazan product) is added immediately after diluting the cells, which are then incubated for 3.5 hours at 37 °C. The resulting blue formazan product is solubilized overnight (16 hours) at 37 °C by the addition of 500 μL of 10% sodium dodecyl sulfate　(SDS) in 0.01 M HCl to each well. A sample (150　μL)　from each duplicate well is transferred to a 96-well　microplate, and the optical density determinedby automated spectrophotometry against a reagent blank (no　cells).　Absorbance is measured at a test wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 690 nm. For each primary cell culture, results from three to six wells from each treatment are averaged, and data are expressed as absorbance 570 to 690 nm.
Studio sugli animali:[5]
  • Modelli animali

    MTLn3 cells are injected into the right fourth mammary fat pad from the head of female severe-combined immunodeficient/NCr mice.

  • Dosaggi

    ≤1 μM

  • Somministrazione

    Administered via i.p.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21778304/
  • #
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21349933/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22556157/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21725367/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22142257/

Convalida del prodotto da parte del cliente

A549 cells were treated with DMSO or PIK-75 (200 nM) for 1 h and subsequently stimulated with izTRAIL for 24 h. Long-term survival was visualized after 7 days by crystal violet staining. One of two independent experiments is shown.

Dati da [ Cell Death Differ , 2014 , 21(3), 491-502 ]

A549 cells were treated with PIK-75 (100 nM) or SNS-032 (300 nM) for the indicated times. Cells were lysed and subjected to western blotting. One representative of two independent experiments is shown.

Dati da [ Cell Death Differ , 2014 , 21(3), 491-502 ]

DW compounds dose-dependently and persistently blocked the PI3K/mTOR signaling pathway in RH30 cells. DW09849 persistently inhibited PI3K signaling. RH30 cells treated with 0.1 uM DW09849 or PIK-75 were harvested at indicated times (0, 0.25, 0.75, 1.5, 3, 6, 12, and 24 hours). Western blot analyses were conducted to detect the indicated proteins. Data shown are representative of three independent experiments. Con, concentration.

Dati da [ J Pharmacol Exp Ther , 2014 , 348(3), 432-41 ]

<p>Knockdown of BRCA1 sensitizes cells to PI3K/AKT pathway inhibitors. MCF7 cells transfected with either BRCA1-siRNA or control-siRNA were treated with increasing amounts of inhibitors targeting the PI3K/AKT pathway for 48 h in triplicate. Viable cells were measured by MTT assay.</p>

Dati da [ Mol Carcinog , 2012 , 52, 667-75 ]

Sellecks PIK-75 HCl È stato citato da 46 Pubblicazioni

Lysosomal PIP3 revealed by genetically encoded lipid biosensors [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2025, 122(13):e2426929122] PubMed: 40127277
The mevalonate pathway contributes to breast primary tumorigenesis and lung metastasis [ Mol Oncol, 2024, 10.1002/1878-0261.13716] PubMed: 39119789
PIK Your Poison: The Effects of Combining PI3K and CDK Inhibitors against Metastatic Cutaneous Squamous Cell Carcinoma In Vitro [ Cancers (Basel), 2024, 16(2)370] PubMed: 38254859
Pharmacological Targeting of Androgen Receptor Elicits Context-Specific Effects in Estrogen Receptor-Positive Breast Cancer [ Cancer Res, 2023, 83(3):456-470] PubMed: 36469363
MDM2 antagonists promote CRISPR/Cas9-mediated precise genome editing in sheep primary cells [ Mol Ther Nucleic Acids, 2023, 31:309-323] PubMed: 36726409
Reciprocal regulation of Daxx and PIK3CA promotes colorectal cancer cell growth [ Cell Mol Life Sci, 2022, 79(7):367] PubMed: 35718818
The Lectin LecB Induces Patches with Basolateral Characteristics at the Apical Membrane to Promote Pseudomonas aeruginosa Host Cell Invasion [ mBio, 2022, 13(3):e0081922] PubMed: 35491830
PIK-75 overcomes venetoclax resistance via blocking PI3K-AKT signaling and MCL-1 expression in mantle cell lymphoma [ Am J Cancer Res, 2022, 12(3):1102-1115] PubMed: 35411248
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Isthmin-1 is an adipokine that promotes glucose uptake and improves glucose tolerance and hepatic steatosis [ Cell Metab, 2021, S1550-4131(21)00326-0] PubMed: 34348115

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