PHA-665752

N. catalogoS1070 Lotto:S107005

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Dati tecnici

Formula

C32H34Cl2N4O4S
Peso molecolare 641.61 Numero CAS 477575-56-7
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 128 mg/mL (199.49 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione PHA-665752 è un inibitore potente, selettivo e ATP-competitivo di c-Met con IC50 di 9 nM in saggi acellulari, >50 volte più selettivo per c-Met rispetto a RTK o STK.
Target
c-Met
(Cell-free assay)		 RON
(Cell-free assay)		 Flk1
(Cell-free assay)
9 nM 68 nM 200 nM
In vitro PHA-665752 inibisce significativamente l'attività della chinasi c-Met con un Ki di 4 nM ed esibisce una selettività >50 volte maggiore per c-Met rispetto a varie tirosina e serina-treonina chinasi. Questo composto inibisce potentemente l'autofosforilazione di c-Met stimolata da HGF con IC50 di 25-50 nM. Blocca anche significativamente funzioni dipendenti da HGF e c-Met come la motilità cellulare e la proliferazione cellulare con IC50 di 40-50 nM e 18-42 nM, rispettivamente. Inoltre, questo composto chimico inibisce potentemente la fosforilazione stimolata da HGF o costitutiva di mediatori a valle di c-Met come Gab-1, ERK, Akt, STAT3, PLC-γ e FAK in molteplici linee cellulari tumorali. Inibisce la crescita cellulare nelle cellule BaF3 trasformate da TPR-MET con IC50 <60 nM e inibisce la motilità e la migrazione cellulare costitutiva del 92,5% a 0,2 μM. L'inibizione di c-Met da parte di questo composto (0,2 μM) induce anche l'apoptosi cellulare del 33,1% e l'arresto del ciclo cellulare in G1 con un aumento delle cellule in fase G1 dal 42,4% al 77,0%. Può cooperare con la rapamicina per inibire la crescita cellulare delle cellule BaF3 trasformate da TPR-MET e delle cellule H441 di carcinoma polmonare non a piccole cellule.
In vivo La somministrazione di PHA-665752 induce un'inibizione della crescita tumorale dose-dipendente degli xenotrapianti S114 del 20%, 39% e 68%, rispettivamente, a dosi di 7,5, 15 e 30 mg/kg/giorno. Il trattamento con questo composto riduce significativamente la crescita tumorale di NCI-H69, NCI-H441 e A549 in xenotrapianti murini del 99%, 75% e 59%, rispettivamente. Inibisce anche significativamente l'angiogenesi di >85%, a causa della diminuzione della produzione del fattore di crescita endoteliale vascolare e dell'aumento della produzione dell'inibitore dell'angiogenesi trombospondina-1.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggio enzimatico in vitro

    La proteina di fusione GST del dominio chinasi c-Met viene utilizzata per il saggio c-Met. Il valore IC50 di PHA-665752 per l'inibizione di c-Met si basa sulla fosforilazione di substrati peptidici chinasi o poli-glu-tyr in presenza di ATP e catione divalente (MgCl2 o MnCl2 10-20 mM). L'intervallo lineare (cioè, il periodo di tempo durante il quale la velocità rimane equivalente alla velocità iniziale) è determinato per c-Met, e la misurazione cinetica e la determinazione dell'IC50 vengono eseguite all'interno di questo intervallo.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    S114, GTL-16, NCI-H441, and BxPC-3

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    18, or 72 hours

  • Metodo

    For proliferation assays, cells are grown in medium with 0.1% FBS for 48 hours after which they are treated with various concentrations of PHA-665752 in HGF (50 ng/mL) in a medium containing 2% FBS. After 18 hours, cells are incubated with BrdUrd for 1 hour, fixed, and stained with anti-BrdUrd peroxidase-conjugated antibody, and plates are read at 630 nm. For apoptosis assays, cells are grown in medium with 2% FBS in presence and absence of HGF (50 ng/mL) and various concentrations of this compound for 72 hours. After 72 hours, a mixture containing ethidium bromide and acridine orange is added, and apoptotic cells (bright orange cells or cell fragments) are counted by fluorescence microscopy.
Studio sugli animali:[1]
  • Modelli animali

    Female athymic mice (nu/nu) bearing S114 or GTL-16 tumor xenografts

  • Dosaggi

    ~30 mg/kg/day

  • Somministrazione

    Injection via bolus i.v.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14612533/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15788682/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17440059/

Convalida del prodotto da parte del cliente

A, representative Western blot analyses of samples obtained from NSCLC cells exposed to 1 umol/L erlotinib or PHA-665,752 for 6 hours. Levels of total and phosphorylated forms of EGFR, MET, and HER3. B, representative Western blot analyses of samples obtained as described in A showing the levels of EGFR downstream signaling mediators. Protein samples obtained from untreated and treated cells were separated by SDS-PAGE and immunoblotted with each antibody. Tubulin served to ensure equal loading.

Dati da [ Clin Cancer Res , 2014 , 20, 4806-15 ]

A, SCID mice bearing established HCC827/GR tumor cell xenografts were treated with each drug. The length and width of the tumors were measured at the days indicated and tumor volumes were calculated. The bars represent mean tumor volume ?SD. B, immunohistochemical staining for Ki-67 and TUNEL, as described in Materials and Methods. Quantitative data for proliferation and apoptotic indices are shown as Ki-67+ cells (left) and TUNEL+ cells (right). *, P < 0.01 and **, P < 0.001 for the combination of gefitinib plus NPS-1034 or gefitinib plus PHA-665752 versus either the control or drug alone.

Dati da [ Cancer Res , 2014 , 74, 253-62 ]

PHA-665752 increases the radiosensitivity and reverses the radioresistance induced by HGF in NPC cells. Radiosensitization induced by PHA-665752 is accompanied by the persistence of the c-H2AX foci. Representative immunofluorescence micrographs of the c-H2AX foci formation in PHA-665752 (1 uM), HGF (20 ng/ml), IR and their combination groups. The micrographs were taken at x 400 magnification.

Dati da [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 449(1), 49-54 ]

Radiosensitization induced by PHA-665752 is accompanied by the persistence of the γ-H2AX foci. (Top) Representative immunofluorescence micrographs of the γ-H2AX foci formation in PHA-665752 (1 uM), HGF (20 ng/ml), IR and their combination groups. The micrographs were taken at x400 magnification. (Bottom) The median number of the γ-H2AX foci per cell. The bars indicate the SD. ∗P < 0.01 compared with the IR alone group.

Dati da [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 449, 49-54 ]

Sellecks PHA-665752 È stato citato da 100 Pubblicazioni

Inhibition of TFF3 synergizes with c-MET inhibitors to decrease the CSC-like phenotype and metastatic burden in ER+HER2+ mammary carcinoma [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):76] PubMed: 39920140
Macrophage Subpopulation Promotes Skeletal Muscle Regeneration Through HGF/MET Signaling-Mediated Skeletal Muscle Stem Cell Proliferation [ Aging Cell, 2025, e70042.] PubMed: 40132988
Overcoming MET-targeted drug resistance in MET-amplified lung cancer by aurora kinase B inhibition [ Biochim Biophys Acta Mol Cell Res, 2025, 1872(7):120001] PubMed: 40499687
MET receptor serves as a promising target in melanoma brain metastases [ Acta Neuropathol, 2024, 147(1):44] PubMed: 38386085
LncRNA CHROMR/miR-27b-3p/MET axis promotes the proliferation, invasion, and contributes to rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma [ J Biol Chem, 2024, 300(3):105762] PubMed: 38367665
Single targeting of MET in EGFR-mutated and MET-amplified non-small cell lung cancer [ Br J Cancer, 2023, 128(12):2186-2196] PubMed: 37059804
Cancer-Associated Fibroblasts Promote Radioresistance of Breast Cancer Cells via the HGF/c-Met Signaling Pathway [ Int J Radiat Oncol Biol Phys, 2023, 116(3):640-654] PubMed: 36586496
MET Receptor Tyrosine Kinase Inhibition Reduces Interferon-Gamma (IFN-γ)-Stimulated PD-L1 Expression through the STAT3 Pathway in Melanoma Cells [ Cancers (Basel), 2023, 15(13)3408] PubMed: 37444518
Cabozantinib inhibits HBV-RNA transcription by decreasing STAT3 binding to the enhancer region of cccDNA [ Hepatol Commun, 2023, 10.1097/HC9.0000000000000313] PubMed: 37938099
Dual-targeting therapy against HER3/MET in human colorectal cancers [ Cancer Med, 2023, 10.1002/cam4.5673] PubMed: 36751113

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