PD 98059

PD98059 inibisce sia MEK1 basale che una MEK parzialmente attivata prodotta dalla mutazione della serina ai residui 218 e 222 in glutammato (MEK-2E) con IC50 di 2 μM. Questo composto non inibisce gli omologhi di MAPK JNK e P38. È altamente selettivo contro MEK, in quanto non inibisce un certo numero di altre attività chinasi, tra cui Raf chinasi, chinasi cAMP-dipendente, proteina chinasi C, v-Src, chinasi del recettore del fattore di crescita epidermico (EGF), chinasi del recettore dell'insulina, chinasi del recettore PDGF e fosfatidilinositolo 3-chinasi. Questo inibitore inibisce l'attivazione di MAPK stimolata da PDGF e l'incorporazione di timidina nelle cellule 3T3 con IC50 di ~10 μM e ~7 μM, rispettivamente. [1] Previene potentemente l'attivazione di MEK1 da parte di Raf o MEK chinasi con IC50 di 4 μM, e inibisce debolmente l'attivazione di MEK2 da parte di Raf con IC50 di 50 μM. Questa sostanza chimica non inibisce l'attivazione degli omologhi di MEK MKK4 e RK chinasi che partecipano alle cascate di chinasi stimolate dallo stress e dall'interleuchina-1 nelle cellule KB e PC12, e l'attivazione della p70 S6 chinasi da parte dell'insulina o del fattore di crescita epidermico nelle cellule Swiss 3T3. [2] Blocca completamente la differenziazione indotta dal fattore di crescita nervoso (NGF) delle cellule PC12 senza alterare la vitalità cellulare. [3] Questo composto inibisce la proliferazione delle cellule RAW264.7 nella coltura contenente RANKL in modo dose-dipendente, con conseguente apparente diminuzione delle cellule positive a TRAP. [4]

Il trattamento di topi 30 minuti prima dell'ischemia cerebrale focale con PD98059 protegge dal danno, con conseguente diminuzione del volume dell'infarto. [5] Il pretrattamento con questo composto 30 minuti prima e poi insieme a iniezioni orarie di ceruleina per 3 ore migliora significativamente la pancreatite acuta indotta da ceruleina sulla base del peso umido pancreatico e dell'istologia. [6] L'amministrazione di questa sostanza chimica (10 mg/kg) nei topi 1 ora dopo la carragenina provoca una riduzione di tutti i parametri di infiammazione misurati. [7]

• Attività inibitoria di MEK in vitro

  L'incorporazione di ³²P nella proteina basica della mielina (MBP) viene saggiata in presenza di proteine di fusione della glutatione S-transferasi (GST) contenenti la MAPK da 44 kDa (GST-MAPK) o la MEK da 45 kDa (GST-MEK1). I saggi vengono condotti in 50 μL di 50 mM Tris, pH 7,4/10 mM MgCl₂/2 mM EGTA/10 μM [γ-³²P]ATP contenenti 10 μg di GST-MEK1, 0,5 μg di GST-MAPK e 40 μg di MBP. Dopo incubazione a 30°C per 15 minuti, le reazioni vengono interrotte con l'aggiunta di tampone per campioni SDS di Laemmli. La MBP fosforilata viene risolta mediante SDS/PAGE al 10%.

• Linee cellulari

  K-Balb, KNRK, v-raf-3Y1, SRA/3Y1, EGFR/3T3, and K562

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Tempo di incubazione

  3 dyas, or 7-10 days

• Metodo

  For monolayer growth, cells are plated into multi-well plates at 10,000-20,000/mL. Forty-eight hours later, various concentrations of PD98059 are added to the cell growth medium and incubation is continued for an additional 3 days. Cells are then removed from the wells by incubation with trypsin and enumerated with a Coulter Counter. For growth in soft agar, cells are seeded into 35-mm dishes at 5,000-10,000 cells per dish with growth medium containing 0.3% agar and desired concentrations of this compound. After 7-10 days of growth, visible colonies are manually enumerated with the aid of a dissecting microscope.

• Modelli animali

  Male Sprague–Dawley rats with acute pancreatitis

• Dosaggi

  10 mg/kg

• Somministrazione

  Injection i.v.