OSU-03012 (AR-12)

OSU-03012 (AR-12) induce la morte apoptotica nelle cellule PC-3 con un IC50 di 5 µM e riduce l'attività della p70^S6K immunoprecipitata. Sopprime completamente la crescita cellulare in una vasta gamma di linee cellulari tumorali a concentrazioni di 3–5 μm, rispetto alla concentrazione di almeno 50 μm. [1] Questo composto promuove la morte cellulare in misura maggiore nelle cellule di glioma che negli astrociti non trasformati. Causa un'induzione dose-dipendente della morte cellulare che non è alterata dalla mutazione p53, dall'espressione di ERBB1 VIII o dalla perdita della funzione di fosfatasi e tensina a causa di una delezione omologa sul cromosoma 10. OSU-03012 e le radiazioni ionizzanti causano un'elevazione additiva, caspasi-indipendente, della morte cellulare. La sua letalità come singolo agente o se combinata con modulatori di segnalazione non è modificata in cellule prive di espressione di BIM o di BAX/BAK. Promuove il rilascio di catepsina B dal compartimento lisosomiale e quello di AIF dai mitocondri. La letalità di questo composto è attenuata nelle cellule con carenza di protein chinasi R-like endoplasmic reticulum kinase-/-, il che è correlato alla ridotta scissione di BID e alla soppressione del rilascio di catepsina B e AIF nel citosol. [2] Inibisce la proliferazione e la migrazione delle cellule tumorali della tiroide (cellule NPA, WRO e ARO) e induce l'apoptosi, il che si traduce in un aumento delle cellule nella fase S senza un aumento delle cellule in G2. OSU-03012 è un inibitore ATP-competitivo dell'attività PAK e sopprime la fosforilazione di AKT nelle cellule tumorali della tiroide. [3] Inibisce la crescita cellulare delle linee cellulari di carcinoma epatocellulare, incluse le cellule Huh7, Hep3B e HepG2, con valori di IC50 inferiori a 1 μM. Questo composto non sopprime l'attività di PDK1 o AKT né induce l'apoptosi cellulare, ma induce l'autofagia nelle cellule Huh7. Inoltre, l'accumulo di specie reattive dell'ossigeno (ROS) viene rilevato dopo il suo trattamento. [4] Uno studio recente mostra che potrebbe aumentare la suscettibilità delle linee cellulari mutanti (Bcr)-Abl all'apoptosi indotta. [5]

OSU-03012 (AR-12) sopprime la crescita tumorale del 57,59% e aumenta la LC3 scissa negli xenotrapianti tumorali Huh7 a 200 mg/kg. [4] Questo composto diminuisce notevolmente l'espressione della proteina EGFR nei tumori del 48% rispetto ai controlli veicolo e impedisce anche a YB-1 di legarsi al promotore EGFR negli xenotrapianti MDA-MB-435/LCC6. [6] È ben tollerato e inibisce la crescita degli xenotrapianti di schwannoma HMS-97 del 55% dopo somministrazione orale. [7]

• Saggio della chinasi PDK-1

  Questo saggio in vitro viene eseguito utilizzando un kit per il saggio della chinasi PDK-1. Questo saggio senza cellule si basa sulla capacità della PDK-1 ricombinante, in presenza di veicolo DMSO o OSU-03012 (AR-12), di attivare la sua chinasi regolata da siero e glucocorticoidi a valle che, a sua volta, fosforila il substrato peptidico specifico della chinasi Akt/siero e regolata da glucocorticoidi RPRAATF con [γ-³²P]ATP. Il substrato peptidico ³²P-fosforilato viene quindi separato dall'ATP [γ-³²P] residuo utilizzando carta fosfocellulosa P81 e quantificato in un contatore a scintillazione dopo tre lavaggi con acido fosforico allo 0,75 %.

• Linee cellulari

  PC-3 cells

• Concentrazioni

  0-10 μM

• Tempo di incubazione

  ~72 hours

• Metodo

  The effect of OSU-03012 (AR-12) on PC-3 cell viability is assessed by using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay in six replicates. Cells are grown in 10% FBS- supplemented RPMI 1640 in 96-well, flat-bottomed plates for 24 hours. They are exposed to various concentrations of this compound (0-10 μM) dissolved in DMSO (final concentration ≤0.1%) in 1% serum-containing RPMI 1640 for different time intervals (~72 hours). Controls receive DMSO vehicle at a concentration equal to that in OSU-03012-treated cells. The medium is removed and replaced by 200 μL of 0.5 mg/mL 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide in 10% FBS-containing RPMI 1640. The cells are incubated in the CO₂ incubator at 37 °C for 2 hours. Supernatants are removed from the wells, and the reduced 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide dye is solubilized in 200 μL DMSO per well. Absorbance at 570 nm is determined by using a plate reader.

• Modelli animali

  Huh7 tumor xenografts in male BALB/c nude mice

• Dosaggi

  100-200 mg/kg

• Somministrazione

  Daily by gavage