Nutlin-3

Nutlin-3 inibisce potentemente l'interazione MDM2-p53, portando all'attivazione della via p53. Questo trattamento composto induce l'espressione di MDM2 e p21 e mostra una potente attività antiproliferativa con IC50 di ~1,5 µM, solo in cellule con p53 wild-type come HCT116, RKO e SJSA-1, ma non nelle linee cellulari p53 mutanti SW480 e MDA-MB-435. Nelle cellule SJSA-1, questo trattamento composto a 10 µM per 48 ore induce significativamente l' Apoptosis cellulare dipendente dalla caspasi di circa il 45%. Sebbene inibisca anche la crescita e la vitalità della pelle umana (1043SK) e dell'embrione di topo (NIH/3T3) con IC50 di 2,2 µM e 1,3 µM, rispettivamente, le cellule rimangono vitali 1 settimana dopo il trattamento anche a 10 µM di questa sostanza chimica, in contrasto con le cellule SJSA-1 con vitalità persa a 3 µM di questo trattamento chimico. [1] Non induce la fosforilazione di p53 sui residui chiave di serina e non rivela alcuna differenza nella loro affinità di legame al DNA sequenza-specifica e nella capacità di transattivare i geni bersaglio di p53 rispetto alla p53 fosforilata indotta dai farmaci genotossici doxorubicina, dimostrando che la fosforilazione di p53 sulle serine chiave è dispensabile per l'attivazione trascrizionale e l' Apoptosis. [2] Sebbene si leghi meno efficacemente a MDMX rispetto a MDM2, questo composto può bloccare l'interazione MDMX–p53 e indurre la via p53 nelle cellule di retinoblastoma (Weri1) con IC50 di 0,7 µM. [3] Questa sostanza chimica a 30 µM interrompe anche l'interazione endogena p73-HDM2 e migliora la stabilità e le attività proapoptotiche di p73, portando all'inibizione della crescita cellulare dose-dipendente e all'induzione di Apoptosis in cellule senza p53 wild-type. [4]

L'amministrazione orale di Nutlin-3 a 200 mg/kg due volte al giorno per 3 settimane inibisce significativamente la crescita tumorale degli xenotrapianti SJAS-1 del 90%, comparabile all'effetto del trattamento con doxorubicina con l'81% di inibizione della crescita tumorale. [1]

• Studio Biacore

  Il saggio di competizione viene eseguito su un Biacore S51. Viene utilizzato un chip sensore della serie S CM5 per l'immobilizzazione di un anticorpo PentaHis per la cattura della p53 His-taggata. Il livello di cattura è di circa 200 unità di risposta (1 unità di risposta corrisponde a 1 pg di proteina per mm²). La concentrazione di proteina MDM2 viene mantenuta costante a 300 nM. Nutlin-3 viene disciolta in DMSO a 10 mM e ulteriormente diluita per creare una serie di concentrazioni di questo composto in ogni campione di test MDM2. Il saggio viene eseguito a 25 °C in tampone di corsa (10 mM Hepes, 0,15 M NaCl, 2% DMSO). Il legame MDM2-p53 in presenza di questa sostanza chimica viene calcolato come percentuale del legame in sua assenza e viene calcolata l'IC50

• Linee cellulari

  HCT116, RKO, SJSA-1, SW480, and MDA-MB-435

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 30 μM

• Tempo di incubazione

  8, 24, and 48 hours

• Metodo

  Cells are exposed to various concentrations of Nutlin-3 for 8, 24 and 48 hours. The transcriptional levels of p21 and MDM2 genes are analyzed by real-time PCR, and protein levels by western blotting. Cell viability is measured by the MTT assay. Cell apoptosis is determined by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling (TUNEL) staining with flow cytometry and fluorescence microscopy.

• Modelli animali

  Athymic female nude mice (Nu/Nu-nuBR) injected subcutaneously with SJSA-1 cells

• Dosaggi

  200 mg/kg

• Somministrazione

  Orally, twice a day