TAE684 (NVP-TAE684)

TAE684 (NVP-TAE684) non mostra una significativa cross-reattività contro altre chinasi. Questo composto inibisce potentemente la proliferazione delle cellule Ba/F3 NPM-ALK con IC50 di 3 nM, senza influenzare la sopravvivenza delle cellule Ba/F3 anche a 1 µM. Inibisce anche la proliferazione delle linee cellulari ALCL umane che esprimono NPM-ALK, inclusi Karpas-299 e SU-DHL-1, con IC50 di 2–5 nM. La modellazione molecolare rivela che L258 può essere uno dei principali determinanti della selettività della chinasi per questa sostanza chimica. Il suo trattamento si traduce in una rapida e sostenuta inibizione della fosforilazione di NPM-ALK. Il composto induce apoptosi e arresto in fase G1 nelle cellule Ba/F3 che esprimono NPM-ALK e nelle linee cellulari di pazienti ALCL. [1] Supera marcatamente la resistenza nelle cellule H3122 CR, che ospitano l'oncogene di fusione EML4-ALK, diminuendo la crescita cellulare, sopprimendo la fosforilazione di ALK e inducendo apoptosi.[2] La crescita dei neuriti indotta dall'espressione del mutante mALK R1279Q potrebbe essere completamente inibita da questo composto a 30 nM. [3]

Dopo 4 settimane di trattamento con TAE684 (NVP-TAE684) a 3 e 10 mg/kg, si osserva un significativo ritardo nello sviluppo del linfoma e una riduzione del segnale di luminescenza da 100 a 1.000 volte, senza alcun segno di tossicità correlata al composto o alla malattia nel modello di linfoma Karpas-299. Questo trattamento con il composto induce anche la regressione della malattia nei linfomi Karpas-299 stabiliti e regola al ribasso l'espressione di CD30. [1] Mostra anche un'impressionante attività antitumorale contro i tumori di xenotrapianto H3122 CR. [2] Inoltre, il trattamento con questa sostanza chimica migliora il fenotipo dell'occhio ruvido di entrambi i mutanti ALK, in particolare quello osservato con ALKR1275Q. [3]

• Saggi enzimatici in vitro.

  Tutti i saggi enzimatici in vitro sono eseguiti presso Upstate Biotechnology ad eccezione di InsR e IGF-1R. Per determinare l'IC50 di TAE684 (NVP-TAE684) contro InsR e IGF-1R viene eseguito un saggio di fluorescenza omogenea risolta nel tempo. ATP (10 mM) e 20 mg/ml di PolyEY biotinilato (Glu, Tyr 4:1) vengono combinati con 50 nL di diluizioni seriali di questo composto (10-500 nM) e 4 ng di enzima InsR in presenza del tampone di reazione della chinasi (20 mM Tris-Cl, pH 7,5/10 mM MgCl₂/3 mM MnCl₂/1 mM DTT/10 mM NaVO₄/0,1 mg/ml di BSA). I saggi vengono incubati per 1 ora a temperatura ambiente. Le reazioni vengono terminate aggiungendo 10 mL della soluzione di rilevazione contenente 50 mM EDTA, 500 mM KF, 0,5 mg/ml di BSA, 5 mg/mL di anticorpo anti-fosfotirosina Mab PT66-K marcato con criptato di Eu3+ e 5 mg/mL di Streptavidin-XLent. La reazione viene incubata per mezz'ora e i segnali di fluorescenza vengono letti su Analyst GT.

• Linee cellulari

  Luciferase-expressing Karpas-299, SU-DHL-1, and Ba/F3 cells and transformed Ba/F3 stably expressing NPM-ALK, Bcr-Abl, or TEL-kinase fusion constructs.

• Concentrazioni

  1 nM-10 μM

• Tempo di incubazione

  2–3 days

• Metodo

  Cells are seeded in 384-well plates (2.5×10⁴ cells per well) and incubated with serial dilutions of TAE684 (NVP-TAE684) or DMSO for 2–3 days. Luciferase expression is used as a measure of cell proliferation/survival and is evaluated with the Bright-Glo Luciferase Assay System. IC50 values are generated by using XLFit software.

• Modelli animali

  Karpas-299 xenografts are established in 4- to 6-week old female Fox Chase SCIDBeige mice.

• Dosaggi

  1, 3, and 10 mg/kg

• Somministrazione

  Once daily by oral gavage for 3 weeks