NVP-ADW742

NVP-ADW742 mostra una selettività 6 volte maggiore per IGF-1R rispetto a InsR con IC50 di 2,8 μM; minima attività inibitoria contro c-Kit, HER1, PDGFR, VEGFR2 o Bcr-Abl p210 con IC50 superiore a 5 μM. Questo composto inibisce significativamente la proliferazione cellulare stimolata dal siero in una varietà di linee cellulari tumorali in modo dose-dipendente, con valori di IC50 di 0,1-0,5 μM per le linee cellulari di mieloma multiplo (MM), e gli effetti antitumorali sulle cellule MM non possono essere superati dalla co-coltura con BMSCs. Inoltre, abroga la responsività delle cellule tumorali all'IL-6 in presenza di siero. Inoltre, questa sostanza chimica è attiva contro le linee cellulari MM con resistenza a agenti antitumorali convenzionali (chemioterapia citotossica) o sperimentali (CC-5013, TRAIL/Apo2L, PS-341), così come cellule tumorali primarie di pazienti con MM con malattia multi-resistente ai farmaci. Questo composto diminuisce la produzione di VEGF da parte delle cellule tumorali e delle cellule stromali del midollo osseo, e sopprime la secrezione di VEGF indotta da IGF-1 da vari tipi di tumori come le cellule di cancro alla tiroide o le cellule MM. L'inibizione di IGF-1R da parte di questo composto (0,75 μM) sensibilizza le cellule MM o le cellule di cancro alla prostata ad altri agenti antitumorali come doxorubicina, TRAIL/Apo2L o PS-341. [1]

L'amministrazione di NVP-ADW742 a 10 mg/kg due volte al giorno inibisce significativamente la crescita tumorale, prolunga la sopravvivenza e migliora l'effetto antitumorale della chemioterapia citotossica nel modello murino di MM diffuso. [1]

• Saggio di attività chinasica cellulare

  Il valore IC50 per l'effetto di NVP-ADW742 sull'autofosforilazione di IGF-1R è determinato a livello cellulare in presenza di concentrazioni crescenti di questo composto, utilizzando saggi “Capture ELISAs” a 96 pozzetti. Brevemente, le cellule NWT-21 vengono seminate in piastre di coltura tissutale a 96 pozzetti in terreno di crescita completo e coltivate fino a una confluenza del 70-80%, e quindi private di siero per 24 ore in terreno con 0,5% di FCS. Successivamente, le cellule vengono incubate per 90 minuti in presenza di questo inibitore, seguite dalla stimolazione con IGF-I (10 ng/mL) per 10 minuti a 37 °C. Successivamente, le cellule vengono lavate due volte con PBS ghiacciato e lisate a 4 °C con 50 μL/pozzetto di tampone RIPA (50 mM Tris-HCl, pH 7.2, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 6 mM EGTA, 1% NP-40, 20 mM NaF, 1 mM benzamidina, 15 mM pirofosfato di sodio, 1 mM PMSF e 0,5 mM Na₃VO₄). I lisati di ogni esperimento vengono quindi trasferiti in piastre ELISA nere pre-rivestite con anticorpi di cattura specifici per IGF-1R. Dopo la cattura da parte degli anticorpi, i lisati vengono miscelati con 40 μL di un Ab anti-fosfotirosina marcato con fosfatasi alcalina (AP) (PY20(AP) diluito a 0,2 μg/mL in tampone RIPA, e incubati durante la notte a 4 °C. Dopo il lavaggio (PBST) e l'incubazione per 45 minuti a temperatura ambiente con il substrato AP luminescente CDPStar RTU con Emerald II (90 μL/pozzetto), la luminescenza viene misurata utilizzando un contatore a scintillazione Packard Top Count.

• Linee cellulari

  MM-1S, MM-1R, RPMI-8226/S, OPM-1, OCI-My5, SKMM2, KMS-12-BM, XG-1, L363, S6B45 cells and et al.

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 10 μM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  Cells are exposed to various concentrations of NVP-ADW742 for 48 hours in the presence or absence of serum. Cell survival is examined using MTT assay.

• Modelli animali

  Male SCID/NOD mice injected i.v. with MM-1S-Luc⁺ human MM cells

• Dosaggi

  10 mg/kg twice daily

• Somministrazione

  Injection i.p. or oral gavage