Mycophenolate mofetil

Mycophenolate mofetil è un profarmaco estere dell'immunosoppressore attivo acido micofenolico (MPA). Quest'ultimo mostra un'attività di inibizione non competitiva, selettiva e reversibile contro l'inosina monofosfato deidrogenasi di tipo I/II con IC50 di 39 nM e 27 nM, rispettivamente. Inoltre, l'MPA produce anche l'inibizione concentrazione-dipendente della proliferazione delle cellule T stimolate da ConA, delle cellule B stimolate da LPS e delle cellule T specifiche per alloantigeni con IC50 di 100 nM, 120 nM e 51 nM, rispettivamente. [1] Questo composto con alta concentrazione di 10 μg/mL induce una forte apoptosis nelle colture di cellule microgliali e aumenta il numero di cellule apoptotiche immunoreattive alla caspasi-3 attivata. Inoltre, (1 μg/mL) inibisce fortemente la proliferazione sia delle cellule microgliali che degli astrociti. [2] Uno studio recente mostra che questa sostanza chimica attenua significativamente l'entità della morte delle cellule neuronali delle colture di sezioni ippocampali organotipiche dopo lesione neuronale in modo tempo-dipendente. [4]

In un modello di trapianto cardiaco eterotopico di ratto ACI-a-Lewis, il trattamento con Mycophenolate mofetil a dosi di 20 mg/kg e 40 mg/kg porta a un prolungamento della sopravvivenza dell'innesto, con un tempo medio di sopravvivenza (MST) di 14,5 giorni e 18,5 giorni, rispettivamente. [1] Nel modello murino di sclerodermia indotta da bleomicina (BLM), questo composto riduce l'infiltrazione di cellule infiammatorie, il contenuto tissutale di idrossiprolina e lo spessore dermico. [3]

• Attività enzimatica dell'IMP dehydrogenase Tipi I e II

  Le IMP dehydrogenase Tipi I e II sono purificate da E. coli che esprimono enzimi umani. Il saggio viene eseguito utilizzando una piastra a 96 pozzetti con fondo piatto, trasparente agli UV. La miscela di reazione finale di 200 μL conteneva 0,1 M Tris, 0,1 M KCl, 3 mM EDTA pH 8,0, 2 mM DTT e 40 nM di IMP dehydrogenase Tipo I o Tipo II. La reazione viene avviata aggiungendo 400 μM NAD e 400 μM IMP, seguita da incubazione a 37 °C per 2,5 ore. La velocità di reazione della conversione del NAD in NADH viene quindi misurata in base all'aumento dell'assorbanza a 340 nm. I saggi vengono eseguiti anche in presenza del 50% di siero umano per stimare il legame alle proteine sieriche da parte di diversi inibitori di IMP dehydrogenase.

• Linee cellulari

  ConA-stimulated T cells and LPS-stimulated B cells

• Concentrazioni

  0 to 10 μM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  The spleens of male Lewis rats aged 8 weeks are aseptically removed and teased into single-cell suspensions, and the resulting splenocytes are suspended in RPMI1640 medium containing 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin, and 100 μg/mL streptomycin. Assays are performed in flat-bottomed microtiter plates, with each well containing 150000 splenocytes in a total volume of 100 μL. Splenocytes are incubated in medium containing either 1 μg/mL Concanavalin A (ConA) or lipopolysaccharide (LPS) as T or B cell mitogen, respectively, along with various concentrations of this compound at 37 °C for 48 hours in a humidified atmosphere of 5% CO₂-95% air. During the final 6 hours of incubation, cells are pulsed with 1 μCi of ³H-thymidine/well, and harvested onto pressed fiberglass in a cell harvester. The uptake of ³H-thymidine by proliferating cells is measured using a liquid scintillation counter. The in vitro immune response of alloantigen-specific T cells is evaluated as a proliferation response using one-way mixed lymphocyte reaction assay. Mesenteric lymph nodes cells from male Lewis rats aged 8 weeks and splenocytes from male ACI rats aged 8 weeks are used as responder and stimulator cells, respectively. Single-cell suspensions are prepared, and the responder cells are cultured with irradiated (20 Gy) stimulator cells in RPMI1640 supplemented with 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin and 100 μg/mL streptomycin, in 96-well plates (U-bottom) and in the presence of various concentrations of this compound (total volume: 200 μL, 37 °C, 5% CO₂ humidified atmosphere, 72 hours). As a negative control, responder cells are cultured with irradiated splenocytes of Lewis rats. The cell proliferation is quantified by the uptake of ³H-thymidine.

• Modelli animali

  Lewis rats with abdominal vascularized heterotopic cardiac transplantation.

• Dosaggi

  ≤40 mg/kg

• Somministrazione

  oral administration