Mubritinib (TAK 165)

Mubritinib (TAK 165) mostra una selettività > 4000 volte superiore rispetto ad altre tirosin chinasi, come EGFR, FGFR, PDGFR, Jak1, Src e Blk. Anche a bassa concentrazione di 0,1 μM, blocca significativamente la fosforilazione di HER2, portando alla down-regolazione delle vie PI3K-Akt e MAPK nella linea cellulare BT474 con alto livello di HER2. Questo composto non solo esibisce un effetto antiproliferativo altamente potente nella linea cellulare tumorale BT474 che sovraesprime ErbB2 con una IC50 di 5 nM, ma mostra anche marcati effetti antiproliferativi nelle linee cellulari con HER2 espresso debolmente con IC50 di 53 nM, 90 nM e 91 nM per LNCaP, LN-REC4 e T24, rispettivamente. Non mostra attività inibitorie contro le cellule PC-3 con HER2 espresso molto debolmente con una IC50 di 4,62 μM, così come le linee cellulari HT1376 e ACHN che sovraesprimono EGFR con una IC50 di >25 μM. [1]

Mubritinib (TAK 165) inibisce significativamente lo xenotrapianto LN-REC4 con un rapporto volume tumorale trattamento/controllo del 26,5%. Sebbene inefficace nell'inibire la crescita delle cellule UMUC-3 e ACHN in vitro (IC50 rispettivamente di 1,812 e >25 μM), la somministrazione orale di questo composto (10 o 20 mg/kg al giorno) inibisce significativamente la crescita degli xenotrapianti UMUC-3 e ACHN con un rapporto volume tumorale trattamento/controllo rispettivamente del 22,9% e 26%, rispetto a 20 mg/kg che è inefficace per la crescita tumorale di UMUC-3. [1]

• Inibizione dell'attività tirosin chinasica di HER2/erbB2

  Le cellule BT-474 vengono seminate su piastre a 24 pozzetti e coltivate per una notte. Mubritinib (TAK 165) viene quindi aggiunto a varie concentrazioni. Dopo un'incubazione di 2 ore, le cellule vengono raccolte direttamente in tampone campione di sodio dodecil solfato (SDS) (200 μL). Aliquote contenenti quantità uguali di estratto cellulare totale vengono sottoposte a elettroforesi su gel di poliacrilammide-SDS (PAGE) con gradiente dal 7,5% al 15%. Dopo l'elettroforesi, le proteine vengono trasferite su una membrana di polivinilidene fluoruro (PVDF), per l'analisi Western blot utilizzando un anticorpo primario rilevante. La rilevazione delle proteine viene eseguita mediante un metodo di rilevazione chemiluminescente potenziato (ECL). L'entità della fosforilazione della tirosina di HER2/erbB2 viene misurata mediante l'analizzatore di immagini luminescenti LAS-1000 plus. La concentrazione di questo composto che inibisce la fosforilazione di HER2/erbB2 del 50% (IC50) viene calcolata da una curva dose-risposta generata mediante regressione lineare dei minimi quadrati della risposta utilizzando il software SAS.

• Linee cellulari

  BT474, HT1376, UMUC-3, T24, ACHN, DU-145, PC-3, LN-REC4, and LNCaP cells

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 mM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Mubritinib (TAK 165) is added at various concentrations after cells are seeded into 6-well plates and cultured overnight, and the cells are treated continuously for 72 hours. After the incubation period, cells are counted for the measurement of antiproliferative activity.

• Modelli animali

  Athymic nude mice (BALB/c nu/nμ) and SCID mice (C.B.-17 Scid/Scid) are implanted subcutaneously with UMUC-3, LN-REC4 or ACHN cells

• Dosaggi

  10 or 20 mg/kg/day

• Somministrazione

  Orally twice daily