Motesanib Diphosphate (AMG-706)

Il Motesanib Diphosphate (AMG-706) ha un'ampia attività contro la famiglia VEGFR umana e mostra una selettività >1000 contro le chinasi EGFR, Src e p38. Inibisce significativamente la proliferazione cellulare delle HUVEC indotta da VEGF con un IC50 di 10 nM, mentre mostra scarso effetto sulla proliferazione indotta da bFGF con un IC50 di >3.000 nM. Questo composto inibisce anche potentemente la proliferazione indotta da PDGF e la fosforilazione di c-Kit indotta da SCF con IC50 di 207 nM e 37 nM, rispettivamente, ma non è efficace contro la fosforilazione di EGFR indotta da EGF e la vitalità cellulare delle cellule A431. [1] Sebbene mostri una scarsa attività antiproliferativa sulla crescita cellulare delle sole HUVEC, sensibilizza significativamente le cellule alla radioterapia frazionata. [2]

L'amministrazione di Motesanib Diphosphate (AMG-706) a 100 mg/kg inibisce significativamente la permeabilità vascolare indotta da VEGF in modo tempo-dipendente. L'amministrazione orale di questo composto due volte al giorno o una volta al giorno inibisce potentemente, in modo dose-dipendente, l'angiogenesi indotta da VEGF utilizzando il modello corneale di ratto con ED50 di 2,1 mg/kg e 4,9 mg/kg, rispettivamente. Induce una regressione tumorale dose-dipendente di xenotrapianti A431 stabiliti mirando selettivamente alla neovascolarizzazione nelle cellule tumorali. [1] Quando somministrato in combinazione con la radioterapia, mostra una significativa attività antitumorale nei modelli di xenotrapianti di carcinoma a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC). [2] Il trattamento con questo composto induce anche significative riduzioni dose-dipendenti della crescita tumorale e della densità dei vasi sanguigni di xenotrapianti MCF-7, MDA-MB-231 o Cal-51. [3]

• Saggi chinasici in vitro

  Le concentrazioni ottimali di enzima, ATP e substrato (peptide gastrina) sono stabilite per ogni enzima utilizzando saggi di fluorescenza a risoluzione temporale omogenea (HTRF). Per il Motesanib Diphosphate (AMG-706), viene testata una curva dose-risposta a 10 punti per ogni enzima utilizzando una concentrazione di ATP pari a due terzi della K_m per ciascuna. La maggior parte dei saggi consiste in enzima miscelato con tampone di reazione chinasica [20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 100 mM NaCl, 1,5 mM EGTA]. Una concentrazione finale di 1 mM DTT, 0,2 mM NaVO₄ e 20 μg/mL BSA viene aggiunta prima di ogni saggio. Per tutti i saggi, 5,75 mg/mL di streptavidina-alloficocianina e 0,1125 nM di Eu-PT66 vengono aggiunti immediatamente prima della reazione HTRF. Le piastre vengono incubate per 30 minuti a temperatura ambiente e lette su uno strumento Discovery. I valori di IC50 vengono calcolati utilizzando l'algoritmo di Levenberg-Marquardt in un'equazione logistica a quattro parametri.

• Linee cellulari

  A431, MO7e, HUVEC and NHDF cells

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Tempo di incubazione

  2 hours

• Metodo

  Cells are preincubated for 2 hours with different concentrations of Motesanib Diphosphate (AMG-706), and exposed with 50 ng/mL VEGF or 20 ng/mL bFGF for an additional 72 hours. After washing twice with DPBS, plates are frozen at -70 °C for 24 hours. Proliferation is assessed by the addition of CyQuant dye, and plates are read on a Victor 1420 workstation. IC50 data are calculated using the Levenberg-Marquardt algorithm into a four-parameter logistic equation.

• Modelli animali

  Female Sprague-Dawley rats with induced corneal angiogenesis, and female CD-1 nu/nu mice injected s.c. with A431 cells

• Dosaggi

  ~100 mg/kg

• Somministrazione

  Orally administered twice daily or once daily