Amuvatinib (MP-470)

Il sale cloridrato di Amuvatinib (MP-470) inibisce diversi mutanti di c-Kit, inclusi c-Kit^D816V, c-Kit^D816H, c-Kit^V560G e c-Kit^V654A, così come un mutante Flt3 (Flt3^D835Y) e due mutanti PDGFRα (PDGFRα^V561D e PDGFRα^D842V), con IC50 da 10 nM a 8,4 μM. Si lega e inibisce anche diversi mutanti di c-Kit, inclusi c-Kit^K642E, c-Kit^D816V e c-Kit^K642E/D816V. [2] Questo composto inibisce potentemente la proliferazione delle cellule OVCAR-3, A549, NCI-H647, DMS-153 e DMS-114, con IC50 da 0,9 μM–7,86 μM. [1] Inibisce anche c-Kit e PDGFRα, con valori di IC50 rispettivamente di 31 μM e 27 μM. Dimostra una potente citotossicità contro le cellule MiaPaCa-2, PANC-1 e GIST882, con IC50 da 1,6 μM a 3,0 μM. [2] Nelle cellule MDA-MB-231, (1 μM) inibisce la fosforilazione della tirosina di AXL. [3] Nelle cellule LNCaP e PC-3, ma non DU145, mostra citotossicità con IC50 rispettivamente di 4 μM e 8 μM, e induce apoptosi a 10 μM. Nelle cellule LNCaP, (10 μM) provoca l'arresto in fase G1 e diminuisce la fosforilazione di Akt ed ERK1/2. [4] Nelle cellule SF767, (10 μM) inibisce la fosforilazione di c-Met e sensibilizza le cellule alle radiazioni. In combinazione con le radiazioni, (10 μM) inibisce l'attività della glicogeno sintasi chinasi (GSK)3β, induce apoptosi e interrompe la riparazione delle rotture del dsDNA probabilmente attraverso la soppressione di Rad51. [5] [6]

Nei modelli di xenotrapianto murino di cellule HT-29, A549 e SB-CL2, Amuvatinib (MP-470) (10 mg/kg–75 mg/kg per via i.p. o 50 mg/kg–200 mg/kg per via orale) inibisce la crescita tumorale. [1] Nei topi portatori di xenotrapianti LNCaP, questo composto (20 mg/kg) combinato con Erlotinib induce significativamente l'inibizione della crescita tumorale (TGI). [4]

• Saggio di inibizione chinasica di c-Kit e PDGFRα

  Per il test dell'attività inibitoria contro c-Kit e PDGFRα, gli enzimi vengono incubati con diverse concentrazioni di Amuvatinib (MP-470) e γ-³²P-ATP radiomarcato. Dopo 30 minuti, le miscele di reazione vengono sottoposte a elettroforesi su gel di acrilammide e l'autofosforilazione, quantificata dalla quantità di radioattività incorporata nell'enzima, viene saggiata.

• Linee cellulari

  MiaPaCa-2, PANC-1, and GIST882 cells

• Concentrazioni

  0–30 μM, dissolved in DMSO

• Tempo di incubazione

  96 hours

• Metodo

  Cells are plated at a density of 2 × 10³ to 1 × 10⁴ cells per well in 100 μL medium on day 0 in 96-well Falcon microtitier plates. On day 1, ten μL of serial dilutions of Amuvatinib (MP-470) are added to the plates in quadruplicates. After incubation for 4 days, the cells are fixed with 10% Trichloroacetic acid solution. Subsequently, they are labeled with 0.04% Sulforhodamine B (SRB) in 1% acetic acid. After multiple washes to remove the excess dye, 100 μL of 50 mM Tris solution is added to each well in order to dissolve the dye. The absorbance of each well is read on a plate reader at 570 nm. Date are expressed as the percentage of survival of control calculated from the absorbance corrected for background absorbance. The surviving percent of cells is determined by dividing the mean absorbance values of the monoclonal antibody by mean absorbance values of the control and multiplying by 100.

• Modelli animali

  Mice (athymic nude) xenograft models of HT-29, A549, and SB-CL2 cells

• Dosaggi

  10 mg/kg–75 mg/kg (i.p.) or 50 mg/kg–200 mg/kg (p.o.)

• Somministrazione

  Oral gavage (qd5 × 3 weeks) or intraperitoneal injection (qd5 × 2 weeks)