Ralimetinib (LY2228820) dimesylate

LY2228820 inibisce la p38α, così come il livello di fosfoMAPKAPK-2 (pMK2) nelle cellule RAW 264.7, con valori di IC50 di 7 nM e 34,3 nM, rispettivamente. Inoltre, LY2228820 inibisce la formazione di TNFα indotta da lipopolisaccaride (LPS) nei macrofagi peritoneali murini, con un'IC50 di 5,2 nM. [1] Nelle cellule di mieloma multiplo (MM), incluse INA6, RPMI-8226, U266 e RPMI-Dox40, LY2228820 (200 nM–800 nM) blocca significativamente la segnalazione di p38MAPK, come rivelato dalla sua inibizione della fosforilazione di HSP27, un bersaglio a valle della p38MAPK, senza influenzare il livello di espressione di HSP27. LY2228820 (200 nM–400 nM) migliora la citotossicità e l'apoptosi, ma LY2228820 da solo non inibisce la crescita delle cellule MM.1S. LY2228820 (200 nM–800 nM) inibisce anche la secrezione di IL-6 e MIP-1α nelle cellule stromali di midollo osseo a lungo termine (LT-BMSC), nelle cellule mononucleate di midollo osseo (BMMNC), nelle cellule CD138⁺, CD138⁻ del sangue periferico (PB) o nelle cellule CD14⁺ del PB. LY2228820 (400 nM–800 nM) blocca anche l'osteoclastogenesi da cellule CD14⁺. [2]

Nei topi indotti da LPS, LY2228820 inibisce efficacemente la formazione di TNFα con una dose minima efficace soglia (TMED₅₀) inferiore a 1 mg/kg. In un modello di ratto con artrite indotta da collagene (CIA), LY2228820 mostra potenti effetti sul gonfiore delle zampe, l'erosione ossea e la distruzione della cartilagine, con una dose minima efficace soglia (TMED₅₀) di 1,5 mg/kg. [1]

• Inibizione di p38α

  L'inibizione di p38α è determinata usando p38α umana ricombinante in un protocollo standard di legame su filtro che utilizza ATP[γ-³³P] e il peptide 21-mero di EGFR come substrato. L'inibizione funzionale del TNFα nei macrofagi peritoneali murini è determinata usando la stimolazione con LPS in presenza di LY2228820. Per valutare l'attività di p38α nelle cellule più direttamente, le cellule RAW 264.7 vengono trattate con LY2228820 e quindi stimolate con anisomicina. Il livello di attività di p38α viene rilevato utilizzando un anticorpo fosfoMAPKAPK-2 (pMK2) (Thr 334) che reagisce con un residuo specificamente fosforilato da p38α.

• Linee cellulari

  MM cells, including INA6, RPMI-8226, U266, and RPMI-Dox40

• Concentrazioni

  200 nM–800 nM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  MTT assays and APO 2.7 staining are performed to assess cellular proliferation and induction of apoptosis, respectively. Viability is expressed as percent viable cells. Apoptosis in cells is evaluated by APO 2.7 staining. For detection of mitochondrial membrane protein 7A6 expressed in apoptotic cells, cells are incubated with APO 2.7 reagent for 20 min. Expression of APO 2.7 is determined using an EPICS XL flow cytometer.

• Modelli animali

  Lipopolysaccharide (LPS)-induced Balb/c mice

• Dosaggi

  0–20 mg/kg

• Somministrazione

  Oral bid dosing for 14 days