Ki8751

N. catalogoS1363 Lotto:S136302

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Dati tecnici

Formula

C₂₄H₁₈F₃N₃O₄

Peso molecolare

469.41

Numero CAS

228559-41-9

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

53 mg/mL (112.9 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	4%DMSO 1 Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	2.500mg/ml (5.33mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 40 μL of 62.5 mg/ml clear DMSO stock solution to 960 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

Ki8751 è un potente e selettivo inibitore di VEGFR2 con IC50 di 0,9 nM, >40 volte più selettivo per VEGFR2 rispetto a c-Kit, PDGFRα e FGFR-2, con poca attività su EGFR, HGFR e InsR.

Target

VEGFR2	c-Kit	PDGFRα
0.9 nM	40 nM	67 nM

In vitro

Ki8751 inibisce potentemente e selettivamente VEGFR2 con un IC50 di 0,9 nM. Questo composto inibisce anche PDGFRα, c-Kit e FGFR-2, con valori di IC50 molto più elevati (40 nM–170 nM). Ad eccezione di queste diverse chinasi, non disturba altre chinasi, inclusi HGFR, EGFR e InsulinR, anche a 10 μM. Nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC), questa sostanza chimica (1 nM–100 nM) diminuisce efficacemente la proliferazione cellulare stimolata da VEGF e la permeabilità vascolare. Nelle cellule di cancro colorettale metastatico (CRC) MIP, RKO, SW620 e SW480, ma non nelle HCT116, esso (10 nM) aumenta la senescenza cellulare.

In vivo

In topi nudi portatori di xenotrapianti tumorali umani di cellule GL07, St-4, LC6, DLD-1 e A375, Ki8751 (20 mg/kg) inibisce la crescita tumorale. In modelli di xenotrapianto di ratti nudi di cellule LC-6, questo composto (5 mg/kg) inibisce completamente la crescita tumorale senza influenzare il peso corporeo.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggi sulle chinasi cellulari Cellule NIH3T3 preparate mediante trasfezione di KDR umano. Le cellule sono coltivate in una piastra a 96 pozzetti rivestita di collagene di tipo I in una quantità di 1,5 × 10⁴ per pozzetto. Il mezzo viene quindi sostituito con un mezzo DMEM contenente 0,1% di FCS. Ki8751 diluito in DMSO viene aggiunto a ciascun pozzetto e coltivato. Il rhVEGF viene aggiunto a una concentrazione finale di 100 ng/mL e la stimolazione delle cellule viene effettuata a 37 °C. Le cellule vengono lavate con PBS (pH 7,4), quindi vengono aggiunti 50 μL di un tampone di solubilizzazione (20 mM HEPES (pH 7,4), 150 mM NaCl, 0,2% Triton X-100, 10% glicerolo, 5 mM Na₃VO₄, 5 mM etilendiammina tetraacetato disodico e 2 mM Na₄P₂O₇) e viene preparato un estratto cellulare. Separatamente, PBS (50 μL, pH 7,4) contenente 5 μg/mL di anticorpo anti-fosfotirosina (PY20) viene aggiunto a una micropiastra per ELISA. Dopo il lavaggio della piastra, vengono aggiunti 300 μL di una soluzione bloccante. L'estratto cellulare viene trasferito sulla piastra. Vengono aggiunti un anticorpo anti-VEGFR2 e un anticorpo anti-Ig di coniglio marcato con perossidasi. Successivamente, viene aggiunto un substrato cromogeno per la perossidasi e l'assorbanza a 450 nm viene misurata con un lettore di micropiastre. L'attività di fosforilazione di VEGFR2 per ciascun pozzetto viene determinata assumendo che l'assorbanza con l'aggiunta di VEGF e senza l'aggiunta del campione di prova sia pari al 100% di attività di fosforilazione di VEGFR2 e che l'aggiunta di VEGF sia pari allo 0% di attività di fosforilazione di VEGFR2. La concentrazione dell'inibizione (%) della fosforilazione di VEGFR2 viene determinata per ciascun caso e viene calcolato il valore di IC50.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari HUVECs Concentrazioni 1 nM–100 nM Tempo di incubazione 1 hour Metodo To evaluate the inhibition of VEGF-Stimulated HUVEC proliferation by Ki8751, HUVECs are plated at a density of 4000 cells/200 μL/well in a type I collagen pre-coated 96-well plates. After 24 hours, the cells are incubated for 1 hour with this compound and then stimulated with 20 ng/mL rhVEGF. The cultures are incubated at 37 °C for 72 hours, then pulsed with 1 μCi/well [³H]thymidine and re-incubated for 14 hours. Cells are assayed for the incorporation of tritium using a beta counter.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggi sulle chinasi cellulari
Cellule NIH3T3 preparate mediante trasfezione di KDR umano. Le cellule sono coltivate in una piastra a 96 pozzetti rivestita di collagene di tipo I in una quantità di 1,5 × 10⁴ per pozzetto. Il mezzo viene quindi sostituito con un mezzo DMEM contenente 0,1% di FCS. Ki8751 diluito in DMSO viene aggiunto a ciascun pozzetto e coltivato. Il rhVEGF viene aggiunto a una concentrazione finale di 100 ng/mL e la stimolazione delle cellule viene effettuata a 37 °C. Le cellule vengono lavate con PBS (pH 7,4), quindi vengono aggiunti 50 μL di un tampone di solubilizzazione (20 mM HEPES (pH 7,4), 150 mM NaCl, 0,2% Triton X-100, 10% glicerolo, 5 mM Na₃VO₄, 5 mM etilendiammina tetraacetato disodico e 2 mM Na₄P₂O₇) e viene preparato un estratto cellulare. Separatamente, PBS (50 μL, pH 7,4) contenente 5 μg/mL di anticorpo anti-fosfotirosina (PY20) viene aggiunto a una micropiastra per ELISA. Dopo il lavaggio della piastra, vengono aggiunti 300 μL di una soluzione bloccante. L'estratto cellulare viene trasferito sulla piastra. Vengono aggiunti un anticorpo anti-VEGFR2 e un anticorpo anti-Ig di coniglio marcato con perossidasi. Successivamente, viene aggiunto un substrato cromogeno per la perossidasi e l'assorbanza a 450 nm viene misurata con un lettore di micropiastre. L'attività di fosforilazione di VEGFR2 per ciascun pozzetto viene determinata assumendo che l'assorbanza con l'aggiunta di VEGF e senza l'aggiunta del campione di prova sia pari al 100% di attività di fosforilazione di VEGFR2 e che l'aggiunta di VEGF sia pari allo 0% di attività di fosforilazione di VEGFR2. La concentrazione dell'inibizione (%) della fosforilazione di VEGFR2 viene determinata per ciascun caso e viene calcolato il valore di IC50.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
HUVECs
Concentrazioni
1 nM–100 nM
Tempo di incubazione
1 hour
Metodo
To evaluate the inhibition of VEGF-Stimulated HUVEC proliferation by Ki8751, HUVECs are plated at a density of 4000 cells/200 μL/well in a type I collagen pre-coated 96-well plates. After 24 hours, the cells are incubated for 1 hour with this compound and then stimulated with 20 ng/mL rhVEGF. The cultures are incubated at 37 °C for 72 hours, then pulsed with 1 μCi/well [³H]thymidine and re-incubated for 14 hours. Cells are assayed for the incorporation of tritium using a beta counter.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15743179/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20367638/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21618508/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ Mol Cell Proteomics , 2012 , 11, 745-57 ]

: Dati da [ , , Cancer Lett, 2017, 385:12-20 ]

: Dati da [ , , PLoS One, 2016, 11(9):e0161332 ]

Sellecks Ki8751 È stato citato da 21 Pubblicazioni

Combined forces of hydrostatic pressure and actin polymerization drive endothelial tip cell migration and sprouting angiogenesis [ Elife, 2025, 13RP98612]	PubMed: 39977018
Eph-ephrin signaling couples endothelial cell sorting and arterial specification [ Nat Commun, 2024, 15(1):2539]	PubMed: 38570531
Paeonol Promotes Reendothelialization After Vascular Injury Through Activation of c-Myc/VEGFR2 Signaling Pathway [ Drug Des Devel Ther, 2023, 17:1567-1582]	PubMed: 37249931
Anlotinib exerts potent antileukemic activities in Ph chromosome negative and positive B-cell acute lymphoblastic leukemia via perturbation of PI3K/AKT/mTOR pathway [ Transl Oncol, 2022, 25:101516]	PubMed: 35985203
Crizotinib and Doxorubicin Cooperatively Reduces Drug Resistance by Mitigating MDR1 to Increase Hepatocellular Carcinoma Cells Death [ Front Oncol, 2021, 11:650052]	PubMed: 34094940
Network Pharmacology Reveals the Mechanism of Activity of Tongqiao Huoxue Decoction Extract Against Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury [ Front Pharmacol, 2020, 11:572624]	PubMed: 33519437
miR-221-3p Regulates VEGFR2 Expression in High-Risk Prostate Cancer and Represents an Escape Mechanism from Sunitinib In Vitro. [ J Clin Med, 2020, 9(3)]	PubMed: 32131507
Small-Molecule and CRISPR Screening Converge to Reveal Receptor Tyrosine Kinase Dependencies in Pediatric Rhabdoid Tumors. [ Cell Rep, 2019, 28(9):2331-2344]	PubMed: 31461650
Roxadustat promotes angiogenesis through HIF-1α/VEGF/VEGFR2 signaling and accelerates cutaneous wound healing in diabetic rats. [ Wound Repair Regen, 2019, 27(4):324-334]	PubMed: 30817065
Secretion-mediated STAT3 activation promotes self-renewal of glioma stem-like cells during hypoxia [ Oncogene, 2018, 37(8):1107-1118]	PubMed: 29155422

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