KU-55933

N. catalogoS1092 Lotto:S109205

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Dati tecnici

Formula

C21H17NO3S2
Peso molecolare 395.49 Numero CAS 587871-26-9
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 79 mg/mL (199.75 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione KU-55933 è un potente e specifico inibitore di ATM con IC50/Ki di 12,9 nM/2,2 nM in saggi acellulari, ed è altamente selettivo per ATM rispetto a DNA-PK, PI3K/PI4K, ATR e mTOR. KU‑55933 (Inibitore della chinasi ATM) inibisce l'attivazione della chinasi ULK1 che inizia l'autofagia e provoca una significativa diminuzione dell'autofagia.
Target
ATM
(Cell-free assay)
12.9 nM
In vitro KU-55933 inibisce DNA-PK e PI3K con IC50 di 2,5 μM e 16,6 μM, rispettivamente. Inoltre, questo composto previene anche l'attività di mTOR con una IC50 di 9,3 μM. È attivo a livello cellulare nell'ablazione di un evento di fosforilazione dipendente da ATM ben caratterizzato. Questa sostanza chimica ha un effetto dose-dipendente nell'inibire questo evento di fosforilazione dipendente da ATM con una IC50 di 300 nM. KU-58050 non previene la fosforilazione di p53 serina 15 dipendente da ATM fino a una dose di 30 μM. L'aggiunta di questo composto non ha effetti apprezzabili sulla fosforilazione indotta da UV di H2AX sulla serina 139, NBS1 sulla serina 343, CHK1 sulla serina 345 e SMC1 sulla serina 966. In netto contrasto con le risposte agli UV, esso abla la fosforilazione indotta da radiazioni ionizzanti di questi substrati ATM. Questa sostanza chimica sensibilizza le cellule HeLa a una gamma di dosi di radiazioni ionizzanti. Inibisce la fosforilazione di Akt indotta da fattori di crescita nelle cellule tumorali. Questo composto sopprime la proliferazione delle cellule tumorali. Inoltre, la soppressione di ATM da parte di questa sostanza chimica migliora la sopravvivenza, probabilmente tramite la prevenzione dell'attivazione a valle di TAp63α.
In vivo La soppressione dell'attivazione di STAT3 dipendente da ATM da parte di KU-55933 potenzia l'apoptosi mediata da TRAIL attraverso l'up-regulation dell'espressione superficiale di DR5, mentre la soppressione sia di STAT3 che di NF-κB sembra essere coinvolta nella down-regulation di cFLIP accompagnata da un ulteriore aumento dei livelli apoptotici. Questo composto influisce sull'apoptosi mediata da TRAIL più fortemente dell'inibitore di JAK2, AG490, o della sovraespressione di STAT3β.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggi enzimatici purificati

    L'ATM da utilizzare nel saggio in vitro è ottenuta dall'estratto nucleare di HeLa mediante immunoprecipitazione con antisiero policlonale di coniglio elevato contro i 400 amminoacidi COOH-terminali di ATM in un tampone contenente 25 mM HEPES (pH 7.4), 2 mM MgCl2, 250 mM KCl, 500 μM EDTA, 100 μM Na3VO4, 10% v/v glicerolo e 0.1% v/v Igepal. I complessi ATM-anticorpo sono isolati dall'estratto nucleare incubando con perle di proteina A-Sepharose per 1 ora e poi mediante centrifugazione per recuperare le perle. Nel pozzetto di una piastra a 96 pozzetti, le perle di Sepharose contenenti ATM vengono incubate con 1 μg di substrato glutatione S-transferasi–p53N66 (66 amminoacidi NH2-terminali di p53 fusi alla glutatione S-transferasi) in tampone di saggio ATM [25 mM HEPES (pH 7.4), 75 mM NaCl, 3 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 50 μM Na3VO4, 500 μM DTT e 5% v/v glicerolo] a 37 °C in presenza o assenza di questo composto. Dopo 10 minuti con agitazione delicata, l'ATP viene aggiunto a una concentrazione finale di 50 μM e la reazione continua a 37 °C per un'altra ora. La piastra viene centrifugata a 250 × g per 10 minuti (4 °C) per rimuovere le perle contenenti ATM, e il surnatante viene rimosso e trasferito in una piastra opaca bianca a 96 pozzetti e incubato a temperatura ambiente per 1.5 ore per consentire il legame della glutatione S-transferasi-p53N66. Questa piastra viene quindi lavata con PBS, asciugata e analizzata mediante una tecnica ELISA standard con un anticorpo anti-p53 fosfo-serina 15. La rilevazione del substrato glutatione S-transferasi-p53N66 fosforilato viene eseguita in combinazione con un anticorpo secondario di capra anti-topo coniugato con perossidasi di rafano. Una soluzione di chemiluminescenza potenziata viene utilizzata per produrre un segnale e viene eseguita la rilevazione chemiluminescente.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    U2OS cells

  • Concentrazioni

    10 μM

  • Tempo di incubazione

    2 hours

  • Metodo

    U2OS cells are exposed to ionizing radiation (3, 5, or 15 Gy) or UV (5 or 50 J/m2) and the ATM response determined by Western blot analysis of p53 serine 15 phosphorylation and stabilization of wild-type p53. Whole cell extracts are obtained from each time point, proteins separated by SDS-PAGE, and the ATM-specific increase in phosphorylated serine 15 measured with a p53 phospho-serine 15 specific antibody. Overall p53 stabilization with time is also observed with a p53-specific antibody (DO-1). Similarly, for studying ATM-dependent phosphorylations on H2AX, CHK1, NBS1, and SMC1, the following antibodies are used: CHK1 phospho-serine 345 and NBS1 phospho-serine 343 antibodies. Histone H2A (H-124) and CHK1 antibodies are also used, as well as SMC1 and SMC1 phospho-serine 966 antibodies. For determination of a cellular IC50 for KU-55933, the peak response time for p53 serine 15 phosphorylation of 2 hours is used to monitor inhibition of ATM. This compound is titrated onto cells and preincubated for 1 hour before ionizing radiation. Using scanning densitometry, the percentage inhibition relative to vehicle control is calculated, and the IC50 value is calculated as for the in vitro determinations.
Studio sugli animali:

[3]
  • Modelli animali

    BALB/c nu/nu nude mice bearing LU1205 cells

  • Dosaggi

    10 μM

  • Somministrazione

    --

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15604286/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21869459/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19351839/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p> </p><p>Effects of NVP-BKM120 and KU-55933 and their combination on the DNA damage response. A, HCC1937 cells were treated for 18 hours with NVP-BKM120 at 2.5 μmol/L, KU-55933 at 10 μmol/L, or their combination, subjected to ionizing radiation(IR) with 10 Gy or mock, lysed 6 hours later, and subjected to immunoblotting with antibodies as indicated.</p>

Dati da [ Cancer Discov , 2012 , 2, 1048-1063 ]

<p> </p><p>59PDb2 repression is restored in c22 by inhibition of DNAPKcs. Shown are representative ChIP QPCR of USF-1 binding at Db2 (A) and Db2 mRNA levels (B) in P5424-c22 1 d after treatment with the indicated kinase inhibitors.</p>

Dati da [ J Immunol , 2012 , 188, 2266-2275 ]

<p>Confocal immunostaining (left panel) graphical representation (right panel) for phosphorylation of S25-53BP1, which is known to be ATM dependent, at different time points following irradiation of HEK 293T parental and p18CycE-expressing cells in the absence or presence of the ATM inhibitor, KU55933. Error bars represent SD (n=3).</p>

Dati da [ Nucleic Acids Res , 2011 , 41, 10157-69 ]

<p>effect of ATM inhibitor in etoposide-induced cell death. The cells were pretreated with KU55933 (2 μM) for 1 h before etoposide treatment.</p><div><div> </div></div><p> </p>

Dati da [ J Biol Chem , 2011 , 286, 8394-8404 ]

Sellecks KU-55933 È stato citato da 413 Pubblicazioni

DNA2 enables growth by restricting recombination-restarted replication [ Nature, 2025, 646(8086):992-1000] PubMed: 40903580
Phase separation of ERCC6L2-CtIP regulates the extent of DNA end resection [ Nat Cell Biol, 2025, 27(10):1771-1784] PubMed: 40913148
EXO1 as a therapeutic target for Fanconi Anaemia, ZRSR2 and BRCA1-A complex deficient cancers [ Nat Commun, 2025, 16(1):8476] PubMed: 41006228
Inherited deficiency of DIAPH1 identifies a DNA double strand break repair pathway regulated by γ-actin [ Nat Commun, 2025, 16(1):4491] PubMed: 40368919
Autophosphorylation of the Tousled-like kinases TLK1 and TLK2 regulates recruitment to damaged chromatin via PCNA interaction [ Nucleic Acids Res, 2025, 53(4)gkae1279] PubMed: 39727191
Homeodomain protein PRRX1 anchors the Ku heterodimers at DNA double-strand breaks to promote nonhomologous end-joining [ Nucleic Acids Res, 2025, 53(6)gkaf200] PubMed: 40114375
Genome rearrangements induced by the stimulation of end-joining of DNA double strand breaks through multiple phosphorylation of MRE11 by the kinase PKB/AKT1 [ Nucleic Acids Res, 2025, 53(11)gkaf468] PubMed: 40479710
The inflammasome sensor NLRP3 interacts with REV7 to maintain genome integrity through homologous recombination [ Nucleic Acids Res, 2025, 53(12)gkaf554] PubMed: 40613708
The histone acetyltransferase CBP participates in regulating the DNA damage response through ATM after double-strand breaks [ Genome Biol, 2025, 26(1):89] PubMed: 40200339
ZSCAN4 functions as a safeguard to maintain centromere integrity during oocyte meiosis [ Genome Biol, 2025, 26(1):204] PubMed: 40665375

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