Hesperadin

N. catalogoS1529 Lotto:S152902

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Dati tecnici

Formula

C₂₉H₃₂N₄O₃S

Peso molecolare

516.65

Numero CAS

422513-13-1

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (193.55 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	2.500mg/ml (4.84mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to make it clear; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

Hesperadin inibisce potentemente Aurora B con un IC50 di 250 nM in un saggio privo di cellule. Riduce marcatamente l'attività di AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 e PHK, mentre non inibisce l'attività di MKK1 in vivo.

Target

TbAUK1 (Cell-free assay)	Aurora B (human) (Cell-free assay)
40 nM	250 nM

In vitro

Hesperadin inibisce la capacità dell'Aurora B immunoprecipitata di fosforilare l'istone H3 con una IC50 di 250 nM e riduce marcatamente l'attività di altre chinasi (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 e PHK) a una concentrazione di 1 μM. Al contrario, solo 20-100 nM di questo composto sono sufficienti per indurre la perdita della fosforilazione mitotica dell'istone H3-Ser10 nelle cellule HeLa. Il suo trattamento causa difetti nella mitosi e nella citocinesi, portando all'arresto della proliferazione delle cellule HeLa e alla poliploïdia, che possono essere specificamente attribuiti all'inibizione della funzione dell'Aurora B durante il processo di attacco dei cromosomi. Questo composto (100 nM) annulla rapidamente l'arresto mitotico indotto da taxolo o monastrol, ma non da nocodazolo. Il suo trattamento e il trattamento con nocodazolo nelle cellule HeLa aboliscono la localizzazione cinetocorica di BubR1 e diminuiscono l'intensità di Bub1 ai cinetocori, suggerendo che la funzione dell'Aurora B è necessaria per un efficiente reclutamento cinetocorico di BubR1 e Bub1, che a sua volta potrebbe essere necessario per una segnalazione prolungata del checkpoint. Previene la fosforilazione dell'istone H3 ricombinante di tripanosoma da parte della T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) del Trypanosoma brucei patogeno con una IC50 di 40 nM in saggi chinasici in vitro. Questa sostanza chimica inibisce significativamente la crescita cellulare delle forme di bloodstream infettive coltivate (BF) con una IC50 di 48 nM, e inibisce solo debolmente la crescita cellulare delle forme procicliche dello stadio dell'insetto (PF) con una IC50 di 550 nM.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Il saggio della chinasi Aurora B Per il saggio della chinasi Aurora B, le cellule HeLa vengono lisate in un tampone contenente 50 mM di NaCl. L'estratto cellulare intero viene centrifugato a 13.000 rpm per 20 minuti a 4 °C utilizzando una centrifuga da banco. Il pellet ottenuto da 200 mg di estratto cellulare intero viene estratto di nuovo in 15 mL di tampone di lisi contenente 250 mM di NaCl al fine di ottenere la chinasi Aurora B attiva dalla cromatina mitotica. Il surnatante a bassa velocità di quest'ultimo estratto viene utilizzato per l'immunoprecipitazione. L'anticorpo monoclonale murino anti-AIM-1, o l'anticorpo murino anti-HA, viene accoppiato a GammaBind Plus Sepharose, e le perline vengono ruotate a testa in giù nell'estratto per 90 minuti a 4 °C. Le perline vengono lavate, aliquotate e lavate in tampone di chinasi (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). Il saggio della chinasi viene eseguito con 10 μL di perline in 20 μL di tampone di chinasi contenente 5 μg di istone H3, 10 μM di ATP, 2,5 μCi di [γ-³²P]ATP e diverse concentrazioni di questo composto per 20 minuti a 37 °C. Viene aggiunto il tampone campione SDS, e i campioni vengono bolliti e risolti mediante SDS-PAGE. Il gel viene essiccato e il segnale radioattivo viene rilevato mediante analisi PhosphorImager. I dati vengono analizzati utilizzando il software ImageQuant.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari HeLa cells and PtK1 cells Concentrazioni Final concentration ~500 nM Tempo di incubazione 24 and 48 hours Metodo Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Il saggio della chinasi Aurora B
Per il saggio della chinasi Aurora B, le cellule HeLa vengono lisate in un tampone contenente 50 mM di NaCl. L'estratto cellulare intero viene centrifugato a 13.000 rpm per 20 minuti a 4 °C utilizzando una centrifuga da banco. Il pellet ottenuto da 200 mg di estratto cellulare intero viene estratto di nuovo in 15 mL di tampone di lisi contenente 250 mM di NaCl al fine di ottenere la chinasi Aurora B attiva dalla cromatina mitotica. Il surnatante a bassa velocità di quest'ultimo estratto viene utilizzato per l'immunoprecipitazione. L'anticorpo monoclonale murino anti-AIM-1, o l'anticorpo murino anti-HA, viene accoppiato a GammaBind Plus Sepharose, e le perline vengono ruotate a testa in giù nell'estratto per 90 minuti a 4 °C. Le perline vengono lavate, aliquotate e lavate in tampone di chinasi (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). Il saggio della chinasi viene eseguito con 10 μL di perline in 20 μL di tampone di chinasi contenente 5 μg di istone H3, 10 μM di ATP, 2,5 μCi di [γ-³²P]ATP e diverse concentrazioni di questo composto per 20 minuti a 37 °C. Viene aggiunto il tampone campione SDS, e i campioni vengono bolliti e risolti mediante SDS-PAGE. Il gel viene essiccato e il segnale radioattivo viene rilevato mediante analisi PhosphorImager. I dati vengono analizzati utilizzando il software ImageQuant.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
HeLa cells and PtK1 cells
Concentrazioni
Final concentration ~500 nM
Tempo di incubazione
24 and 48 hours
Metodo
Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12707311/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19320832/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: Dati da [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: ,

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Hesperadin È stato citato da 52 Pubblicazioni

Homologous recombination promotes non-immunogenic mitotic cell death upon DNA damage [ Nat Cell Biol, 2025, 27(1):59-72]	PubMed: 39805921
A CPC-shelterin-BTR axis regulates mitotic telomere deprotection [ Nat Commun, 2025, 16(1):2277]	PubMed: 40097392
Identification of chemical inhibitors targeting long noncoding RNA through gene signature-based high throughput screening [ Int J Biol Macromol, 2025, 292:139119]	PubMed: 39722392
Rsk2 inhibition induces an aneuploid post-mitotic arrest of cell cycle progression in osteosarcoma cells [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):318]	PubMed: 40634321
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023]	PubMed: 40795355
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739]	PubMed: 39276350
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604]	PubMed: 38757760
Histone H3 phospho-regulation by KimH3 in both interphase and mitosis [ iScience, 2023, 26(4):106372]	PubMed: 37013187
Rsk2 and Lrp5 deficiency limit osteosarcoma growth in cFos-transgenic mice by different mechanisms [ ProQuest , 2023, 30683696]	PubMed: None
Hesperadin suppresses pancreatic cancer through ATF4/GADD45A axis at nanomolar concentrations [ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02328-4]	PubMed: 35551503

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