GSK690693

GSK690693 è molto selettivo per le isoforme di Akt rispetto alla maggior parte delle chinasi di altre famiglie. Tuttavia, questo composto è meno selettivo per i membri della famiglia delle chinasi AGC, inclusi PKA, PrkX e gli isoenzimi PKC con IC50 di 24 nM, 5 nM e 2-21 nM, rispettivamente. Inibisce anche potentemente AMPK e DAPK3 della famiglia CAMK con IC50 di 50 nM e 81 nM, rispettivamente, e PAK4, 5 e 6 della famiglia STE con IC50 di 10 nM, 52 nM e 6 nM, rispettivamente. Questa sostanza chimica inibisce la fosforilazione di GSK3β nelle cellule tumorali con IC50 che vanno da 43 nM a 150 nM. Il suo trattamento porta a un aumento dose-dipendente dell'accumulo nucleare del fattore di trascrizione FOXO3A. Questo composto inibisce potentemente la proliferazione delle cellule T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453 e LNCaP con IC50 di 72 nM, 79 nM, 86 nM, 119 nM, 975 nM e 147 nM, rispettivamente. Il suo trattamento induce apoptosi a concentrazioni >100 nM sia nelle cellule LNCaP che BT474. [1] Coerentemente con il ruolo di AKT nella sopravvivenza cellulare, induce apoptosi nelle linee cellulari ALL sensibili. [2]

Una singola somministrazione di GSK690693 inibisce la fosforilazione di GSK3β negli xenotrapianti di carcinoma mammario umano (BT474) in modo dose- e tempo-dipendente. Allo stesso modo, questo composto induce una riduzione della fosforilazione dei substrati di Akt, PRAS40 e FKHR/FKHRL1. Provoca anche un aumento acuto della glicemia, che torna ai livelli basali 8-10 ore dopo la somministrazione del farmaco. La somministrazione di questa sostanza chimica induce riduzioni dei substrati di Akt fosforilati in vivo e inibisce potentemente la crescita di xenotrapianti di carcinoma ovarico SKOV-3 umano, prostata LNCaP e carcinoma mammario BT474 e HCC-1954, con un'inibizione massima dal 58% al 75% alla dose di 30 mg/kg/die. [1] Questo composto mostra efficacia indipendentemente dal meccanismo di attivazione di Akt coinvolto. È più efficace nel ritardare la progressione tumorale nei topi Lck-MyrAkt2 che esprimono una forma di Akt legata alla membrana e costitutivamente attiva. [3]

• Saggi chinasici in vitro

  Akt1, 2 o 3 a lunghezza intera con tag His vengono espressi e purificati da baculovirus. L'attivazione viene eseguita con PDK1 purificata per fosforilare Thr308 e MK2 purificata per fosforilare Ser473. Per misurare con maggiore precisione l'inibizione tempo-dipendente di Akt, gli enzimi Akt attivati vengono incubati con GSK690693 a varie concentrazioni a temperatura ambiente per 30 minuti prima che la reazione venga avviata con l'aggiunta di substrato. La reazione finale contiene da 5 nM a 15 nM di enzimi Akt1, 2 e 3; 2 μM di ATP; 0,15 μCi/μL [γ-³³P]ATP; 1 μM di peptide (Biotin-aminohexanoicacid-ARKR-ERAYSFGHHA-amide); 10 mM di MgCl₂; 25 mM di MOPS (pH 7,5); 1 mM di DTT; 1 mM di CHAPS; e 50 mM di KCl. Le reazioni vengono incubate a temperatura ambiente per 45 minuti, seguite dall'interruzione con perle Leadseeker in PBS contenente EDTA (concentrazione finale, 2 mg/mL di perle e 75 mM di EDTA). Le piastre vengono quindi sigillate, le perle vengono lasciate sedimentare per almeno 5 ore e la formazione del prodotto viene quantificata utilizzando un Viewlux Imager.

• Linee cellulari

  T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453, LNCaP, etc.

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cells are plated at densities that allow untreated cells to grow logarithmically during the course of a 3-day assay. Briefly, cells are plated in 96- or 384-well plates and incubated overnight. Cells are then treated with this compound (ranging from 30 μM-1.5 nM) and incubated for 72 hours. Cell proliferation is measured using the CellTiter Glo reagent. Data are analyzed using the XLFit curve-fitting tool for Microsoft Excel. IC50 values are obtained by fitting data to Eq, 2.

• Modelli animali

  Female CD1 Swiss Nude mice injected with LNCaP, SKOV-3, or PANC1 cells, and C.B-17 SCID mice with HCC1954, MDA-MB-453, or BT474 cells

• Dosaggi

  ~30 mg/kg/day

• Somministrazione

  Administered via i.p.