GSK461364

GSK461364 inibisce la proliferazione delle linee cellulari tumorali da molteplici origini con tossicità minima nelle cellule umane non in divisione. [1] Il silenziamento dell'RNA di p53 WT aumenta l'attività antiproliferativa di questo composto. Poiché molte terapie antitumorali tendono ad essere più efficaci nei pazienti con p53 WT, la maggiore sensibilità dei tumori deficienti in p53 a questa sostanza chimica potrebbe potenzialmente offrire un'opportunità per trattare i tumori refrattari ad altre chemioterapie, nonché una terapia di prima linea per questi genotipi. Questo composto è un tiofene ammide che inibisce l'enzima Plk1 purificato in vitro con un K_i di 2 nM e ha una selettività >100 volte maggiore per Plk1 rispetto a Plk2 e Plk3. È un potente inibitore della proliferazione cellulare che causa un'inibizione della crescita del 50% (GI50) inferiore a 100 nM nella maggior parte delle linee cellulari testate con tossicità limitata contro le cellule umane non proliferanti. L'inibizione della progressione del Cell Cycle è concentrazione-dipendente con un ritardo iniziale in fase G2 a concentrazioni elevate di questo agente e un arresto in fase M a concentrazioni più basse. Attualmente, è in una sperimentazione di escalation di dose per la prima volta nell'uomo. Le linee cellulari con mutazioni nel gene TP53 tendevano ad essere più sensibili a questo composto, e l'inibizione della risposta p53 mediante silenziamento dell'RNA conferisce una maggiore sensibilità in alcune cellule p53 wild-type (WT). Inoltre, queste linee cellulari più sensibili hanno anche livelli aumentati di instabilità cromosomica, una caratteristica associata alle mutazioni di TP53. [2] Nei test preclinici, questa sostanza chimica mostra attività antiproliferativa contro molteplici (>120) linee cellulari tumorali e inibisce potentemente la proliferazione di oltre l'83% e il 91% di queste linee cellulari, con valori di IC50 inferiori a 50 e 100 nM, rispettivamente. [3]

L'inibizione della crescita delle colture cellulari da parte di GSK461364 può essere citostatica o citotossica, ma porta alla regressione tumorale in modelli di tumore xenograft con una corretta pianificazione della dose. Questo composto mostra una chiara attività antitumorale nei modelli di xenograft di tumori umani. [1] Mostra un arresto mitotico dose-dipendente negli xenograft murini, che correla con gli effetti sulla crescita tumorale. [2] La somministrazione intraperitoneale di questa sostanza chimica provoca regressione o ritardo della crescita tumorale in diversi modelli di xenograft, inclusi gli xenograft di Colo205. La soppressione di Plk1 in vivo utilizzando questo agente si traduce in un arresto mitotico con figure mitotiche aberranti consistenti in fusi mitotici monopolari o collassati. [3]

• Saggi enzimatici

  Le reazioni di chinasi vengono eseguite in un volume di saggio finale di 10 μL utilizzando il kit di saggio Z-Lyte (peptide Ser/Thr 16). In breve, le reazioni contengono 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 0,01% Brij 35, 0,01 mg/mL caseina, 200 μM ATP, 200 μM peptide Polo Box (NH₂-MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH) e 6 nM Plk1 ricombinante (H6-tev-PLK 1-603). Plk1 viene preincubato per 60 minuti con 0-1 μM GSK461364. Le reazioni vengono quindi avviate con l'aggiunta di 2 μM di peptide. Dopo 15 minuti a 23 °C, le reazioni vengono bloccate e processate secondo il protocollo Z'-Lyte e lette su un lettore di piastre EnVision. I valori di fluorescenza grezzi vengono convertiti in concentrazione di prodotto formato utilizzando standard di substrato e prodotto. Poiché la potenza di inibizione per questo composto è osservata variare in funzione della concentrazione di ATP in modo coerente con un modo di inibizione competitivo dell'ATP, viene determinato un limite superiore per il K_i per questa sostanza chimica.

• Linee cellulari

  Prostate(LNCap,PC3), Cervix(HeLa), Pancreas(ASPC1), Sarcoma(Saos-2)Ovary(OVCAR8), Stomach(NCI-N87), Melanoma(SKMEL3,A431, MALME3M), Colon(Colo205,SW620,HCT116), Breast(SKBR3,MDA-MB-453,MCF7), Lung(NCI-H82,MV522,NCI-H522), etc.

• Concentrazioni

  10 nM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cancer cell lines are seeded into 384-well microtiter plates. After seeding, the cells are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 24 hours. GSK461364 is added to each cell line at 10 nM with a nontreated control. A zero-time (T = 0) value is read for each cell line. After 72 hours, the medium containing this compound or DMSO control is aspirated from all of the remaining cells and the cell nuclei are stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole and the fluorescent intensity measured using an InCell1000 High Content Analyzer. The percent intensity of the 4′,6-diamidino-2-phenylindole stain at 72 hours, relative to intensity at time zero, is calculated for each concentration of this chemical in each of the triplicate wells.

• Modelli animali

  Nude mice bearing Colo205 (colorectal) xenograft tumors

• Dosaggi

  25, 50, and 100 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.p.(every 2 days or every 4 days)