GSK1059615

N. catalogoS1360 Lotto:S136001

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Dati tecnici

Formula

C₁₈H₁₁N₃O₂S

Peso molecolare

333.36

Numero CAS

958852-01-2

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

2 mg/mL (5.99 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.100mg/ml (0.30mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.100mg/ml (0.30mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

GSK1059615 è un doppio inibitore di PI3Kα/β/δ/γ (reversibile) e mTOR con IC50 di 0,4 nM/0,6 nM/2 nM/5 nM e 12 nM, rispettivamente. Fase 1.

Target

PI3Kα (Cell-free assay)	PI3Kβ (Cell-free assay)	PI3Kδ (Cell-free assay)	PI3Kγ (Cell-free assay)	mTOR (Cell-free assay)
0.4 nM	0.6 nM	2 nM	5 nM	12 nM

In vitro

Il derivato piridinilchinolinico GSK1059615 è un nuovo inibitore, ATP-competitivo e reversibile della famiglia di classe I delle PI3K. Questo composto inibisce la segnalazione di PI3K, induce l'arresto in fase G1 e l'apoptosi, specialmente nelle cellule tumorali mammarie. I dati riassunti in un'altra recensione mostrano anche che questo inibitore inibisce PI3Kα, β, γ e δ, con K_i di 0,42 nM, 0,6 nM, 0,47 nM e 1,7 nM, rispettivamente. Un altro rapporto mostra che questa sostanza chimica inibisce PI3Kα con IC50 di 2 nM. Nelle cellule tumorali T47D e BT474, inibisce la fosforilazione di Akt a S473, con IC50 di 40 nM.

In vivo

In modelli murini di xenotrapianto di cellule di cancro al seno BT474 o HCC1954, GSK1059615 (25 mg/kg) inibisce efficacemente la crescita tumorale.

Caratteristiche

Un inibitore nuovo, ATP-competitivo e reversibile sia di PI3Kα, β, δ, e γ, sia di mTOR.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[4]}	Saggi di profilazione in vitro HTRF per l'inibizione di PI3K La misurazione dell'inibizione delle PI3K dipendente da GSK1059615 viene eseguita utilizzando un kit di saggio di profilazione delle PI3K basato su HTRF. Vengono utilizzati 400 pM di enzima nei saggi PI3Kα e δ, 200 pM nei saggi PI3Kβ e 1 nM nel saggio PI3Kγ. Inoltre, i saggi PI3Kα, β e δ vengono eseguiti con 150 mM NaCl e 100 μM ATP, mentre il saggio PI3Kγ viene eseguito senza NaCl e con 15 μM ATP. Tutte le reazioni vengono eseguite a 10 μM PIP2. Questo composto viene diluito in serie (3 volte in DMSO) e 50 nL vengono trasferiti in una piastra da 384 pozzetti a basso volume. Il tampone di reazione per PI3K viene preparato diluendo la soluzione madre 1:4 con acqua deionizzata. Il DTT appena preparato viene aggiunto a una concentrazione finale di 5 mM il giorno dell'uso. L'aggiunta dell'enzima e la pre-incubazione di questa sostanza chimica vengono avviate con l'aggiunta di 2,5 µL di PI3K nel tampone di reazione. Le piastre vengono incubate a temperatura ambiente per 15 min. Le reazioni vengono avviate con l'aggiunta di 2,5 µL di soluzione di substrato 2× (PIP2 e ATP in tampone di reazione 1×). Le piastre vengono incubate a temperatura ambiente per un'ora. Le reazioni vengono bloccate con l'aggiunta di 2,5 µL di soluzione di stop. Le reazioni bloccate vengono quindi elaborate per rilevare la formazione del prodotto aggiungendo 2,5 µL di soluzione di rilevamento. Dopo un'incubazione di 1 ora al buio, il segnale HTRF viene misurato sul lettore di piastre Envision impostato per l'eccitazione a 330 nm e la rilevazione a doppia emissione a 620 nm (Eu) e 665 nm (APC). Il valore di IC50 viene quindi ottenuto.
Saggio cellulare:^{^[4]}	Linee cellulari T47D and BT474 cells Concentrazioni 0–1 μM, serially diluted (3-fold) in DMSO Tempo di incubazione 30 min Metodo Cells are plate at a density of 1 × 10⁴ cells per well in clear flat-bottomed 96-well plates and incubated overnight. Then, GSK1059615 is added and the plates are incubated for 30 min. At the end of incubation, media is aspirated from the plates, and the plate is wash once with cold PBS. 80 μL MSD Lysis buffer is added into each well and the plates are incubated on a shaker at 4 °C for at least 30 min. For Akt duplex assay, plates are washed with 200 μL/well wash buffer for 4 times and tapped on paper towel to blot. Then, 60 μL lysates is added to each well and the plates are incubated on shaker at room temperature for 1 hour. After another 4 times washing, antibody is added (25 μL per well) and the plates are incubated on shaker for 1 hour and washed again. Finally, Read Buffer is added (150 μL per well) and the plates are read immediately. IC50 values are then obtained.

Saggio della chinasi:^{^[4]}

Saggi di profilazione in vitro HTRF per l'inibizione di PI3K
La misurazione dell'inibizione delle PI3K dipendente da GSK1059615 viene eseguita utilizzando un kit di saggio di profilazione delle PI3K basato su HTRF. Vengono utilizzati 400 pM di enzima nei saggi PI3Kα e δ, 200 pM nei saggi PI3Kβ e 1 nM nel saggio PI3Kγ. Inoltre, i saggi PI3Kα, β e δ vengono eseguiti con 150 mM NaCl e 100 μM ATP, mentre il saggio PI3Kγ viene eseguito senza NaCl e con 15 μM ATP. Tutte le reazioni vengono eseguite a 10 μM PIP2. Questo composto viene diluito in serie (3 volte in DMSO) e 50 nL vengono trasferiti in una piastra da 384 pozzetti a basso volume. Il tampone di reazione per PI3K viene preparato diluendo la soluzione madre 1:4 con acqua deionizzata. Il DTT appena preparato viene aggiunto a una concentrazione finale di 5 mM il giorno dell'uso. L'aggiunta dell'enzima e la pre-incubazione di questa sostanza chimica vengono avviate con l'aggiunta di 2,5 µL di PI3K nel tampone di reazione. Le piastre vengono incubate a temperatura ambiente per 15 min. Le reazioni vengono avviate con l'aggiunta di 2,5 µL di soluzione di substrato 2× (PIP2 e ATP in tampone di reazione 1×). Le piastre vengono incubate a temperatura ambiente per un'ora. Le reazioni vengono bloccate con l'aggiunta di 2,5 µL di soluzione di stop. Le reazioni bloccate vengono quindi elaborate per rilevare la formazione del prodotto aggiungendo 2,5 µL di soluzione di rilevamento. Dopo un'incubazione di 1 ora al buio, il segnale HTRF viene misurato sul lettore di piastre Envision impostato per l'eccitazione a 330 nm e la rilevazione a doppia emissione a 620 nm (Eu) e 665 nm (APC). Il valore di IC50 viene quindi ottenuto.

Saggio cellulare:^{^[4]}

Linee cellulari
T47D and BT474 cells
Concentrazioni
0–1 μM, serially diluted (3-fold) in DMSO
Tempo di incubazione
30 min
Metodo
Cells are plate at a density of 1 × 10⁴ cells per well in clear flat-bottomed 96-well plates and incubated overnight. Then, GSK1059615 is added and the plates are incubated for 30 min. At the end of incubation, media is aspirated from the plates, and the plate is wash once with cold PBS. 80 μL MSD Lysis buffer is added into each well and the plates are incubated on a shaker at 4 °C for at least 30 min. For Akt duplex assay, plates are washed with 200 μL/well wash buffer for 4 times and tapped on paper towel to blot. Then, 60 μL lysates is added to each well and the plates are incubated on shaker at room temperature for 1 hour. After another 4 times washing, antibody is added (25 μL per well) and the plates are incubated on shaker for 1 hour and washed again. Finally, Read Buffer is added (150 μL per well) and the plates are read immediately. IC50 values are then obtained.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19589091/
#
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20582534/

http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ml900028r

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Convalida del prodotto da parte del cliente

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

: , , Antonino Maria Spartà from University of Bologn

: , , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

: , , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

Sellecks GSK1059615 È stato citato da 15 Pubblicazioni

PIK-75 overcomes venetoclax resistance via blocking PI3K-AKT signaling and MCL-1 expression in mantle cell lymphoma [ Am J Cancer Res, 2022, 12(3):1102-1115]	PubMed: 35411248
Phytochemicals inhibit migration of triple negative breast cancer cells by targeting kinase signaling. [ BMC Cancer, 2020, 20(1):4]	PubMed: 31898540
Lethal Poisoning of Cancer Cells by Respiratory Chain Inhibition plus Dimethyl α-Ketoglutarate [ Cell Rep, 2019, 27(3):820-834]	PubMed: 30995479
FRET biosensor-based kinase inhibitor screen for ERK and AKT activity reveals differential kinase dependencies for proliferation in TNBC cells. [ Biochem Pharmacol, 2019, 169:113640]	PubMed: 31536726
[ ACS Pharmacol Transl Sci, 2019, ]	PubMed: 32259061
Inhibition of RPTOR overcomes resistance to EGFR inhibition in triple-negative breast cancer cells [ Int J Oncol, 2018, 52(3):828-840]	PubMed: 29344641
Development of a test that measures real-time HER2 signaling function in live breast cancer cell lines and primary cells. [Huang Y, et al. BMC Cancer, 2017, 17(1):199]	PubMed: 28302091
Single and Combination Drug Screening with Aqueous Biphasic Tumor Spheroids [ SLAS Discov, 2017, 22(5):507-515]	PubMed: 28324660
Gerosuppression by pan-mTOR inhibitors [ Aging (Albany NY), 2016, 8(12):3535-3551]	PubMed: 28077803
Multiparametric Analysis of Oncology Drug Screening with Aqueous Two-Phase Tumor Spheroids. [ Mol Pharm, 2016, 13(11):3724-3735]	PubMed: 27653969

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