Fedratinib (TG101348)

Fedratinib (TG101348) inibisce significativamente JAK2 V617F, Flt3 e Ret con IC50 di 3 nM, 15 nM e 48 nM, rispettivamente. Questo composto ha un IC50 ~300 volte superiore per JAK3 strettamente correlato ed è un inibitore meno potente dei membri della famiglia JAK1 e TYK2. Inibisce la proliferazione di una linea cellulare di leucemia eritroblastica umana (HEL) che ospita la mutazione JAK2V617F, così come una linea cellulare murina pro-B che esprime JAK2V617F umano (Ba/F3 JAK2V617F), con IC50 di 305 nM e 270 nM, rispettivamente. TG-101348 inibisce anche la proliferazione delle cellule Ba/F3 parentali a un livello paragonabile, con IC50 di ~420 nM. Il suo trattamento riduce la fosforilazione di STAT5 a concentrazioni che parallelano le concentrazioni richieste per inibire la proliferazione cellulare. TG101348 induce l'Apoptosis sia nelle cellule HEL che in quelle Ba/F3 JAK2V617F in modo dose-dipendente. Non mostra attività proapoptotica nei fibroblasti dermici umani normali di controllo a concentrazioni fino a 10 μM, e l'IC50 antiproliferativo contro i fibroblasti è >5 μM. [1] Questo trattamento con il composto diminuisce l'espressione di GATA-1, che è associata allo skewing eritroide della differenziazione dei progenitori JAK2V617F⁺, e inibisce STAT5 così come la fosforilazione di GATA S310. [2] TG101348 inibisce la proliferazione delle cellule HMC-1.1 (KITV560G), con una potenza leggermente inferiore rispetto alle cellule HMC-1.2 (KITD816V, KITV560G), con IC50 di 740 nM e 407 nM, rispettivamente. [3]

Fedratinib (TG101348) ha il potenziale per un trattamento efficace delle malattie mieloproliferative (MPD) associate a JAK2V617F. Negli animali trattati, si osserva una riduzione statisticamente significativa dell'ematocrito e del numero di leucociti, una riduzione/eliminazione dose-dipendente dell'ematopoiesi extramidollare e, almeno in alcuni casi, evidenza di attenuazione della mielofibrosi, correlata a endpoint surrogati, inclusa la riduzione/eliminazione del carico di malattia JAK2V617F, la soppressione della formazione endogena di colonie eritroidi e l'inibizione in vivo della trasduzione del segnale JAK-STAT. Non ci sono tossicità apparenti e nessun effetto sul numero di cellule T. [1] La somministrazione orale di questo composto (120 mg/kg) inibisce significativamente la differenziazione eritroide dei progenitori PV in vivo. [2]

• Saggi di attività chinasica senza cellule

  I valori di IC50 di Fedratinib (TG101348) sono determinati commercialmente utilizzando il servizio di profilazione delle chinasi InVitrogen per uno screening di 223 chinasi che includeva JAK2 e JAK2V617F o Carna Biosciences per lo screening di tutti i membri della famiglia Janus chinasi, inclusi JAK1 e Tyk2. La concentrazione di ATP è impostata approssimativamente al valore Km per ciascuna chinasi.

• Linee cellulari

  EpoBa/F3 JAK2V617F, Ba/F3p210, HEL, and K562

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Approximately 2 × 10³ cells are plated into microtiter-plate wells in 100 μL RPMI-1640 growth media with indicated concentrations of inhibitor. Following 72 hours incubation with Fedratinib (TG101348), 50 μL of XTT dye are added to each well and incubated for 4 hours in a CO₂ incubator. The colored formazan product is measured by spectrophotometry at 450 nm with correction at 650 nm. The concentration in which 50% of the effect (i.e., inhibition of proliferation) is observed (IC50) is determined using the GraphPad Prism 4.0 software. All experiments are performed in triplicate, and the results are normalized to growth of untreated cells. Induction of apoptosis of EpoBa/F3 JAK2V617F, Ba/F3p210, HEL, and K562 cells is determined by DNA fragmentation with DMSO and increasing concentrations of this compound.

• Modelli animali

  C57BL/6 mice injected intravenously with whole bone marrow expressing JAK2V617F

• Dosaggi

  ~120 mg/kg

• Somministrazione

  Oral gavage twice daily (b.i.d.)