Patupilone (Epothilone B)

Patupilone (Epothilone B) mostra un'attività migliore rispetto all'Epothilone A, con un EC_0.01 di 1,8 μM. Inibisce potentemente la proliferazione cellulare nelle cellule HCT116, con IC50 di 0,8 nM. [1] Questo composto induce l'arresto mitotico e mostra citotossicità nelle cellule KB3-1, KBV-1, Hela e Hs578T, con IC50 da 3 nM a 92 nM. Compete con il Taxol nel legame ai microtubuli, con IC50 di 3,3 μM. [2] Nelle cellule MCF-7 che sovraesprimono GFP-α-tubulina, esso (3,5 nM) blocca efficacemente la dinamica dei microtubuli. Nel frattempo, induce l'arresto mitotico con IC50 di 3,5 nM. [3] Nelle cellule di mieloma multiplo (MM), incluse RPMI 8226, U266, MM.1S, LR5 e MR20, sopprime direttamente la proliferazione con IC50 da 1 nM a 10 nM. Analogamente, esso (10 nM) induce anche l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi. [4] Uno studio recente rivela che, nelle cellule Hey di cancro ovarico, esso (5 nM–100 nM) migliora l'antigene di adesione delle cellule epiteliali di superficie (EpCAM), senza influenzare la trascrizione o il livello cellulare totale di EpCAM. [5]

In un modello di xenotrapianto murino di cellule RPMI 8226, Patupilone (Epothilone B) (2,5 mg/kg–4 mg/kg) prolunga la sopravvivenza e sopprime la crescita tumorale. [4] Analogamente, questo composto alla stessa dose inibisce anche la crescita tumorale in modelli di xenotrapianto murino di cellule di cancro alla prostata, inclusi DU145 e PC3. [6]

• Saggio di polimerizzazione della tubulina

  Le proteine dei microtubuli (MTP) di cervello di vitello vengono purificate, includendo circa il 15%-20% di proteine associate ai microtubuli. Il tampone (tampone MES) utilizzato per gli studi Epothilone B-microtubuli contiene 0,1 M di acido 2-morfolinoetansolfonico (MES), 1 mM di EGTA e 0,5 mM di MgCl₂ a pH 6,6. I campioni per la microscopia elettronica vengono posti su griglie rivestite di carbonio-Parlodion (300 mesh) e colorati negativamente con acetato di uranile al 2%. L'assemblaggio dei microtubuli in presenza o assenza di Patupilone (Epothilone B) viene monitorato spettrofotometricamente utilizzando uno spettrofotometro dotato di un circolatore di liquido a regolazione termostatica. La temperatura viene mantenuta a 35 °C e le variazioni di torbidità (rappresentative della massa polimerica) vengono monitorate a 350 nm. La concentrazione efficace (EC_0.01), definita come la concentrazione interpolata capace di indurre una pendenza iniziale di 0,01 OD/min, viene calcolata utilizzando la formula EC_0.01 = concentrazione/pendenza ed espressa come la media con deviazione standard ottenuta da tre diverse concentrazioni.

• Linee cellulari

  KB3-1, KBV-1, Hela, and Hs578T cells

• Concentrazioni

  0–1 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, they are treated with Patupilone (Epothilone B) and scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2/M transition and aberrant mitosis.

• Modelli animali

  Mice xenograft model of RPMI 8226 cells

• Dosaggi

  2.5 mg/kg–4 mg/kg

• Somministrazione

  Inject intravenously