In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
40%PEG300
5%Tween80
50%ddH2O
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
5.000mg/ml
(10.13mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO
95% Corn oil
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
0.625mg/ml
(1.27mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 12.5 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Epothilone A è un agente stabilizzante dei microtubuli simile al paclitaxel con EC0.01 di 2 μM.
Target
Tubulin
2 μM(EC0.01)
In vitro
L'Epothilone A, scoperta dalla mixobatterio Sorangium cellulosum, è un agente stabilizzante dei microtubuli simile al Taxol che induce la polimerizzazione della tubulina, portando all'arresto del ciclo cellulare alla transizione G2-M, citotossicità e apoptosi. Questo composto inibisce potentemente la proliferazione cellulare nelle cellule HCT116, con IC50 di 4,4 nM. Mostra anche citotossicità nelle cellule KB3-1, KBV-1, Hela e Hs578T, con valori di IC50 che vanno da 13 nM a 160 nM. Questa sostanza chimica è più solubile in acqua rispetto al Taxol e compete con il Taxol nel legame con i microtubuli, con IC50 di 2,3 μM. Tuttavia, sia questo composto che il Taxol non condividono un farmacoforo comune e sfruttano la tasca di legame della tubulina in modo unico e indipendente. Recentemente, è stato scoperto che la trasformazione microbiologica di questo composto da parte di Aspergillus niger AS 3.739 produce diversi metaboliti che sono anch'essi tossici per le cellule MCF-7, ma con valori di IC50 molto più elevati.
Le proteine dei microtubuli (MTP) del cervello di vitello vengono purificate, includendo circa il 15%-20% di proteine associate ai microtubuli. Il tampone (tampone MES) utilizzato per gli studi sull'Epothilone A-microtubulo contiene 0,1 M di acido 2-morfolinoetansolfonico (MES), 1 mM di EGTA, 0,5 mM di MgCl2 e 3 M di glicerolo a pH 6,6. I campioni per la microscopia elettronica vengono posti su griglie rivestite di carbonio su Parlodion (300 mesh) e colorati negativamente con acetato di uranile al 2%. L'assemblaggio dei microtubuli in presenza o assenza di questo composto viene monitorato spettrofotometricamente utilizzando uno spettrofotometro dotato di un circolatore di liquido a regolazione termostatica. La temperatura viene mantenuta a 35 °C e le variazioni di torbidità (rappresentative della massa polimerica) vengono monitorate a 350 nm. La concentrazione efficace (EC0.01), definita come la concentrazione interpolata in grado di indurre una pendenza iniziale di 0,01 OD/min, viene calcolata utilizzando la formula EC0.01 = concentrazione/pendenza ed espressa come la media con la deviazione standard ottenuta da tre diverse concentrazioni.
24 hours for mitotic arrest or 72 hours for cytotoxicity
Metodo
For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for trypan blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, cells are treated with Epothilone A and are scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as trypan blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst 33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2-M transition and aberrant mitosis.
Riferimenti
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11506611/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/7757983/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15297674/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19431017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/1672157/
Sellecks Epothilone A È stato citato da 6 Pubblicazioni
β3 accelerates microtubule plus end maturation through a divergent lateral interface
[ Mol Biol Cell, 2025, 36(4):ar36]
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