Danoprevir

N. catalogoS1183 Lotto:S118301

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Dati tecnici

Formula

C35H46FN5O9S
Peso molecolare 731.83 Numero CAS 850876-88-9
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 144 mg/mL (196.76 mM)
Ethanol 144 mg/mL (196.76 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 3.600mg/ml (4.92mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 72 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 1.210mg/ml (1.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 24.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Danoprevir è un inibitore peptidomimetico della proteasi NS3/4A del virus dell'epatite C (HCV) con un IC50 di 0,2-3,5 nM; l'effetto inibitorio per i genotipi HCV 1A/1B/4/5/6 è circa 10 volte superiore a quello per 2B/3A. Fase 2.
Target
HCV NS3/4A protease
0.2 nM-3.5 nM
In vitro

Danoprevir (0,29 nM) inibisce la proteasi NS3/4A del genotipo 1 di riferimento a metà concentrazione massima, ma una dose elevata di questo composto (10 μM) non mostra un'inibizione apprezzabile in un pannello di 79 proteasi, canali ionici, trasportatori e recettori di superficie cellulare. Rimane legato e inibisce NS3/4A per più di 5 ore dopo la sua associazione iniziale. Questa sostanza chimica (45 nM) elimina un replicone del genotipo 1b dell'HCV derivato da pazienti dalle cellule Huh7 derivate da epatociti con un EC50 di 1,8 nM. Nelle linee cellulari di replicone subgenomico dell'HCV contenenti le singole mutazioni, le sostituzioni V36M, R109K e V170A conferiscono poca o nessuna resistenza ad esso, ma la sostituzione R155K conferisce un alto livello (aumento di 62 volte) di resistenza a questo composto. Nelle cellule Huh7.5 trasfettate con virus ricombinante chimerico, mostra effetti di inibizione antivirale contro i genotipi 1, 4 e 6 dell'HCV con IC50 di 2-3 nM, che sono >100 volte inferiori rispetto ai genotipi 2/3/5 (280-750 nM).

In vivo

Danoprevir (30 mg/kg) somministrato a ratti o scimmie mostra che le sue concentrazioni nel fegato 12 ore dopo la somministrazione superano la concentrazione di questo composto richiesta per eliminare l'RNA replicone dalle cellule.

Caratteristiche Un inibitore peptidomimetico della proteasi NS3/4A del virus dell'epatite C (HCV).

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio di trasferimento di energia di risonanza per fluorescenza continuo (FRET)

    Il tampone del saggio contiene 25 μM di peptide NS4A, 50 mM di Tris-HCl, pH 7,5, 15% vol/vol, 10 mM di ditiotreitolo e 0,5 μM di substrato FRET marcato con QXL520 {Ac-DE-Dap(QXL520)-EE-Abu-ψ-[COO]-AS-Cys(5-FAMsp)-NH2}. Viene aggiunto l'enzima K2040 (50 pM) per avviare la reazione. Le reazioni vengono allestite in piastre nere a 96 pozzetti e vengono raccolti i dati di fluorescenza. Sono incluse reazioni di controllo senza inibitori ed enzima. Le velocità iniziali vengono calcolate dalla fase lineare della reazione (fino a 1 ora) e vengono utilizzate per ottenere l'IC50. Il recupero dell'attività dal complesso preformato di questo composto-NS3/4A viene valutato preincubando 10 nM di NS3/4A con un eccesso doppio di questa sostanza chimica in tampone di saggio 1× per 15 minuti, seguito da una rapida diluizione di 200 volte del complesso preformato in tampone di saggio contenente il substrato. Una reazione di controllo con le stesse condizioni finali senza preincubazione di NS3/4A e di questo composto viene avviata mediante l'aggiunta dell'enzima a una miscela di reazione altrimenti completa. Reazioni di controllo aggiuntive sono prive di questa sostanza chimica o di NS3. Il progresso delle reazioni viene seguito per 5 ore.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    Huh7 cells harboring HCV replicon

  • Concentrazioni

    5 pM - 100 nM

  • Tempo di incubazione

    48 hours

  • Metodo

    Serially diluted Danoprevir is added to Huh7 cells harboring the K2040 replicon 1 day after cell plating. For antiviral assays, after a 48-hour incubation, intracellular RNA is extracted, and the level of HCV replicon RNA is quantified by reverse transcription (RT)-PCR assay with the primers (5'-CACTCCCCTGTGAGGAACTACTG-3' and 5'-AGGCTGCACGACACTCATACT-3') and a probe (5'-6-FAM-CTTCACGCAGAAAGCGTCTAGCCATGG-MGBNFQ-3' using an ABI Prism 7900 sequence detection system. Here, FAM is 6-carboxyfluorescin and MGBNFQ is a molecular-groove binding non-fluorescence quencher specific to the HCV 5' untranslated region. Single-tube reactions are performed using the TaqMan Gold RT-PCR kit. Triplicate reactions for the RNA standards and samples are performed in 50 μL with 5 μL intracellular RNA (50 ng). RT is carried out at 48 °C for 30 min followed by 10 min at 95 °C. The PCR is run as follows: 15 seconds at 95 °C and 1 min at 60 °C for 40 cycles. Each RNA concentration is determined in triplicate. The absolute concentration of replicon RNA is calculated based on its signal relative to that of a standard curve generated by known concentrations of an in vitro-transcribed RNA corresponding to a genotype 1b 5' untranslated region. Replicon levels in the presence of this compound are fitted to a four-parameter logistic function to obtain EC50.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Sprague-Dawley rats, Cynomolgus monkeys

  • Dosaggi

    30 mg/kg

  • Somministrazione

    Oral gavage

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18824605/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18637752/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21480315/

Convalida del prodotto da parte del cliente

Western blot analysis of HCV NS3 protease cleavage of MAVS. The catalytic efficiency of four proteases (H, H-A156T, 41 and 41-A156T) from individuals H and 41 were tested in the absence or presence of an NS3 protease inhibitor (danoprevir). Expression of the HCV NS3 proteases resulted in cleavage of the lambda cI repressor with MAVS cleavage site. Expression of the protease was induced with IPTG for 3 h. The lambda cI repressor with MAVS cleavage site was not cleaved by an NS3 protease that included a substitution in catalytic residue S139A. Similarly, different catalytic efficiencies were observed with different proteases.

Dati da [ Mol Biol Evol , 2014 , 31(6), 1546-53 ]

Suppression of HCV replication by anti-HCV inhibitors. HCV-Feo replicon-containing cells were seeded in 96-well plates at a density of 1 x 10<sub>4</sub> cells/well. Twenty-four hours later, cells were exposed to the indicated concentrations of danoprevir. After a 72-hour treatment with inhibitors, cells were harvested and firefly luciferase activity was measured. Results are the means and SDs of three independent experiments (upper panels). PrestoBlue cell viability reagent (Invitrogen, CA) was used to examine the cytotoxic effect of inhibitors according to the manufacturer

Dati da [ Antimicrob Agents Chemother , 2012 , 56(10), 5365-73 ]

<p>Inhibition of HCV and CHV NS3/4A proteases in the presence of the protease inhibitors (A) 25a or (B) danoprevir. The graph illustrates the relative (%) lambda phage titer after selective growth of lambda in E. coli cells coexpressing the NS3/4A protease constructs and the lambda cI repressor expressing either MAVS or TRIF cleavage sites in the absence or presence of protease inhibitors (20 mM). No significant inhibition was detected with an HCV NS3/4A protease mutant carrying the substitution D168V, which confers resistance to protease inhibitors. Values are the means 6 standard deviations (error bars) of at least three experiments.</p>

Dati da [ PLoS One , 2012 , 7, e42481 ]

<p>Effects of TNFα, etanercept, and danoprevir on HCV infection in HFLC. Cells (n=6 wells/condition) were treated with TNFα (20 ng/ml) ± etanercept (1 μg/ml), danoprevir (2 μM), or media control before and during infection with Jc1G. Secreted luciferase was measured 96 hours after the start of infection. Box-and-whiskers plot; whiskers represent minimum and maximum values. Values of p were calculated by one-way ANOVA. ***, p < 0.001; ****, p < 0.0001</p>

, , Gastroenterology, 2017, 153(2):566-578

Sellecks Danoprevir È stato citato da 22 Pubblicazioni

Targeting eEF1A reprograms translation and uncovers broad-spectrum antivirals against cap or m6A protein synthesis routes [ Nat Commun, 2025, 16(1):1087] PubMed: 39920115
The exon junction complex coordinates the cotranscriptional inclusion of blocks of neighboring exons [ Genes Dev, 2025, 10.1101/gad.353081.125] PubMed: 41102016
Zbtb16 determines the fate plasticity of cardiovascular progenitors through IGF2BP3-mediated mRNA stabilization [ Cell Rep, 2025, 44(8):116127] PubMed: 40779394
Small Molecule Targeting of Atypical p38 Protects Against Viral Infection [ FASEB J, 2025, 39(20):e71096] PubMed: 41082179
Preclinical characterization of a non-peptidomimetic HIV protease inhibitor with improved metabolic stability [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0137323.] PubMed: 38380945
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
RECOVER identifies synergistic drug combinations in vitro through sequential model optimization [ Cell Rep Methods, 2023, 3(10):100599] PubMed: 37797618
Integrative multiomics and in silico analysis revealed the role of ARHGEF1 and its screened antagonist in mild and severe COVID-19 patients [ J Cell Biochem, 2022, 10.1002/jcb.30213] PubMed: 35037717
Hepatitis C virus drugs that inhibit SARS-CoV-2 papain-like protease synergize with remdesivir to suppress viral replication in cell culture [ Cell Rep, 2021, 35(7):109133] PubMed: 33984267
Characterization of fluorescent probe substrates to develop an efficient high-throughput assay for neonatal hepatic CYP3A7 inhibition screening [ Sci Rep, 2021, 11(1):19443] PubMed: 34593846

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