Cyclopamine (11-Deoxojervine)

N. catalogoS1146 Lotto:S114609

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Dati tecnici

Formula

C27H41NO2
Peso molecolare 411.62 Numero CAS 4449-51-8
Solubilità (25°C)* In vitro Ethanol 4 mg/mL (9.71 mM)
DMSO Insoluble
Water Insoluble
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione La Cyclopamine (11-deoxojervine) è un antagonista specifico della via di segnalazione Hedgehog (Hh) di Smoothened (Smo) con una IC50 di 46 nM nelle cellule TM3Hh12.
Target
Smoothened
(TM3Hh12 cells)
46 nM
In vitro La ciclopamina inibisce la via di segnalazione Hedgehog con un IC50 di 46 nM e blocca l'attività del recettore umano Smo espresso nelle cellule CHO-K1 nel saggio di legame [3H]Hh-Ag con un IC50 di 280 nM. Questo composto inibisce significativamente l'attività della via Hedgehog in modo dose-dipendente nelle linee cellulari tumorali derivate dall'intestino che esprimono l'mRNA di Patched (PTCH) e induce un'inibizione della crescita di queste linee cellulari tumorali del 75-95% alla concentrazione di 3 μM, ma è inefficace nei confronti delle cellule tumorali del colon senza espressione dell'mRNA di PTCH, suggerendo che gli effetti di questo trattamento chimico sono correlati alla via Hedgehog piuttosto che generalmente citotossici. Bloccando la segnalazione Hedgehog attraverso l'interazione diretta con Smo, essa (10 μM) inibisce la proliferazione delle linee cellulari L3.6sl e Panc 05.04, responsive alla Cyclopamine SMOhigh, del 75-80% e aumenta l'apoptosi di 2,5-3,5 volte, senza influenzare la linea cellulare BxPC3-SMOlow. Questo trattamento diminuisce significativamente l'mRNA di Snail e aumenta i trascritti di E-caderina nella linea cellulare E3LZ10.7. Indipendentemente dall'inibizione della crescita cellulare, inibisce significativamente il fenotipo invasivo delle cellule L3.6pl dipendenti da Hedgehog, causando una riduzione >500 volte del numero di cellule transmigranti, ma non quello della linea cellulare Panc-1 indipendente da Hedgehog.
In vivo La somministrazione di Cyclopamine alla dose di 50 mg/kg/giorno per 22 giorni eradica gli xenotrapianti HUCCT1 nei topi senza evidenti effetti avversi. Questo trattamento composto alla dose di 1,2 mg per 7 giorni induce un'apoptosi significativa delle cellule tumorali e diminuisce la massa tumorale del 50-60% nei tumori derivati da Panc 05.04 e L3.6sl, rispettivamente, ma non nei tumori BxPC3-SMOlow. [3] La somministrazione di questo agente chimico da solo inibisce profondamente le metastasi tumorali negli xenotrapianti di E3LZ10.7 e L3.6pl, e abroga completamente le metastasi in combinazione con la gemcitabina.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggio cellulare Hedgehog

    Questo saggio misura lo stadio finale della via di segnalazione Hh, cioè la modulazione trascrizionale di Gli, usando la Luciferasi come lettura (saggio Gli-Luc). La ciclopamina viene preparata per il saggio mediante diluizione seriale in DMSO e quindi aggiunta a piastre di saggio vuote. Le cellule TM3Hh12 (cellule TM3 contenenti il costrutto genico reporter responsivo a Hh pTA-8xGli-Luc) vengono risospese in F12 Ham's/DMEM (1:1) contenente 5% di FBS e 15 mM di Hepes pH 7.3, aggiunte alle piastre di saggio e incubate con questo composto per circa 30 minuti a 37 °C in 5% di CO2. 1 nM di Hh-Ag 1.5 viene quindi aggiunto alle piastre di saggio e incubato a 37 °C in presenza di 5% di CO2. Dopo 48 ore, viene aggiunto il reagente Bright-Glo o MTS alle piastre di saggio e viene determinata la luminescenza o l'assorbanza a 492 nm. Il valore di IC50, definito come il punto di flesso della curva logistica, viene determinato mediante regressione non lineare della luminescenza della luciferasi guidata da Gli o del segnale di assorbanza del saggio MTS rispetto al log10 (concentrazione) di questa sostanza chimica utilizzando il pacchetto software statistico R.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    SEG1, OE33, KYAE, KYSE180, SNU1, AGS, SNU16, NCI-N-87, HUCCT1, PANC1, PL5, PL6, BXPC3, HS766T, KYSE150, GBD1, DLD1, and HCT116

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentration 3 μM

  • Tempo di incubazione

    4 days

  • Metodo

    Cells are exposed to Cyclopamine in 96-well plates. Cell viability is measured by MTS (soluble tetrazolium salt) assay. Viable cell mass is determined by optical density measurements at 490 nm (OD490) at 2 and 4 days using the CellTiter96 colorimetric assay. Relative growth is calculated as OD (day 4)﹣OD (day 2)/OD (day 2).
Studio sugli animali:[2]
  • Modelli animali

    Athymic (nude) mice inoculated subcutaneously with HUCCT1 cells

  • Dosaggi

    50 mg/kg/day

  • Somministrazione

    Subcutaneous injection

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19091559/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520411/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520413/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17332349/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>(A)[3H]thymidine incorporation assay of B16F10 melanoma cells treated with DMSO or cyclopamine after incubation with SA-CM from WT and Cav1KO dermal fibroblasts. Representative phase-contrast images of B16F10 cells treated with SA-CM from WT and Cav1KO fibroblasts with cyclopamine are shown on the right. Similar experiments (B) were done with A-375 cells incubated with SA-CM from hTBJ1-shCtrl and hTBJ1-shCAV1 cells.</p>

Dati da [ Cancer Res , 2012 , 72, 2262-74 ]

<p>(A) The effects of cyclopamine (10 μM) in pancreatic cancer cell invasion. The number of migrated cells was quantified by counting the number of cells from 10 random fields at 200 magnification. (B) The effects of cyclopamine on the expression of EMT-related molecules E-cadherin and vimentin, and Hh pathway-related proteins SMO and Gli-1 were analyzed by Western blotting following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor cyclopamine. Normal culture was used as a negative control. (C) The EMT-related molecules Ecadherin and vimentin mRNA levels, and Hh pathway-related genes at mRNA level were analyzed by real-time RT-PCR following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor Cyclopamine. Normal culture was used as a negative control.</p>

Dati da [ Cancer Lett , 2012 , 322, 169-176 ]

<p>(A) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) for 72 hours promoted expansion of CD34+ cells and CD34- cells, cyclopamine (10 μM) for 72 hours induced apoptosis of CD34+ cells and CD34- cells, as measured by 3-(3,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) assay, n =4, bars, standard deviation. *Statistically significant compared with CD34+ cells. (B) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) promoted cell expansion after 48 hours and cyclopamine (10 μM) induced cell apoptosis within 24 hours measured by MTT assay (n=6).</p>

Dati da [ Exp Hematol , 2012 , 40, 418-27 ]

<p>For MTT assays, cells (2,000 ~ 5,000 cells/well) were subcultured into 96-well plates according to their growth properties. Cell proliferation was assayed at 72 hr after treatment of Cyclopamine by adding 20 μl of 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution per 100 μl of growth medium. After incubating for 3-4 h at 37°C, the media were removed and 150 µl/well of MTT solvent (either absolute DMSO or isopropanol containing 4 mM HCl and 0.1% Nonidet-40) was added to dissolve the formazan. The absorbance of each well was measured by ELx808 (BioTek, Winooski, VT) or Wallac Victor2 (Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA) Microplate Reader. Viable cells are presented as percent of control, vehicle-treated cells.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

Sellecks Cyclopamine (11-Deoxojervine) È stato citato da 148 Pubblicazioni

The O-glycosyltransferase C1GALT1 promotes EWSR1::FLI1 expression and is a therapeutic target for Ewing sarcoma [ Nat Commun, 2025, 16(1):1267] PubMed: 39894896
PlexinD1 is a driver and a therapeutic target in advanced prostate cancer [ EMBO Mol Med, 2025, 17(2):336-364] PubMed: 39748059
PPARG contributes to urothelial integrity in the murine ureter by activating the expression of Shh and superficial cell-specific genes [ Development, 2025, 152(8)dev204324] PubMed: 40167323
Interplay of SHH, WNT and BMP4 signaling regulates the development of the lamina propria in the murine ureter [ Development, 2025, 152(3)DEV204214] PubMed: 39817691
Hedgehog inhibitors exert anti-proliferation effects and synergistically interact with trastuzumab in HER2-positive gastric cancer models [ Acta Oncol, 2025, 64:715-728] PubMed: 40426308
Inhibition of PI3K and Hedgehog Signaling Pathway Inhibits Hypoxia-Induced Vasculogenic Mimicry Formation in Ovarian Cancer Stem Cells [ Balk Med J, 2025, 42(5):440-451] PubMed: 40888349
SHH Pathway Inhibition and Astrocyte Co-culture Induce Distinct Responses in Glioblastoma and Cancer Stem Cells [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-7214243] PubMed: 40894044
Proximity based proteomics reveals Git1 as a regulator of Smoothened signaling [ bioRxiv, 2025, 2025.01.06.631593] PubMed: 39829937
Foxo3-mediated physiological cell competition ensures robust tissue patterning throughout vertebrate development [ Nat Commun, 2024, 15(1):10662] PubMed: 39690179
Phosphorylation of human glioma-associated oncogene 1 on Ser937 regulates Sonic Hedgehog signaling in medulloblastoma [ Nat Commun, 2024, 15(1):987] PubMed: 38307877

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