Clemastine (HS-592) Fumarate

Il Clemastine Fumarato inibisce l'aumento di [Ca²⁺]_i indotto dall'istamina nelle cellule HL-60 con un IC50 di 3 nM rispetto a quello della clorfeniramina o della difenidramina con valori di IC50 di 20 nM e 100 nM, rispettivamente. [1]

A concentrazioni ≥25 μM, il Clemastine Fumarato blocca significativamente le reazioni NK e ADCC dei linfociti contro la linea cellulare di eritroleucemia umana K562 e la linea cellulare di linfoblasti B umani SB, rispettivamente. [2]

Il Clemastine Fumarato inibisce la contrazione dell'ileo di cavia indotta dall'istamina con un IC50 di 231 nM. [3]

Il Clemastine Fumarato inibisce potentemente il canale K⁺ HERG in modo concentrazione-dipendente nelle cellule HEK 293 che esprimono stabilmente i canali HERG con un IC50 di 12 nM, che può essere attenuato dalla mutazione Y652A o F656A di HERG. [4]

Il Clemastine Fumarato potenzia significativamente l'aumento di [Ca²⁺]_i indotto dall'ATP nelle cellule HEKhP2X7 non basandosi sul blocco del histamine receptor ma sulla sensibilizzazione del recettore P2X7 in modo concentrazione-dipendente con un EC50 di 10 μM, e aumenta il rilascio di IL-1β dai macrofagi umani indotti da LPS. [5]

L'amministrazione di Clemastine Fumarato (5-20 mg/kg) mostra un effetto inibitorio significativo sull'edema della zampa indotto da zimozano e sull'edema dell'orecchio indotto da olio di croton nei ratti in modo dose-dipendente, con un'inibizione rispettivamente del 53,6% e del 46,8% alla dose di 20 mg/kg, e con valori di ID50 rispettivamente di 18,0 mg/kg e 20,5 mg/kg. [6]

Il trattamento con Clemastine Fumarato riduce fortemente le risposte immunitarie innate a Listeria monocytogenes nei topi interferendo con la produzione di citochine proinfiammatorie come TNF-α e IL-6 mediate dalla chinasi regolata dal segnale extracellulare (ERK), sorprendentemente non dipendente dal blocco del histamine H1 receptor, portando a una mortalità significativamente più elevata. [7]

• Inibizione di [Ca²⁺]_i

  Le cellule HL-60 sono sospese a 1×10⁷ cellule/mL in un tampone composto da 138 mM NaCl, 6 mM KC1, 1 mM MgSO4, 1 mM Na₂HPO₄, 5 mM NaHCO₃, 5,5 mM glucosio e 20 mM HEPES-NaOH, pH 7,4, supplementato con 0,1% (p/v) di albumina sierica bovina. Il colorante fura-2/AM è aggiunto a una concentrazione di 4 μM e le cellule vengono incubate per 10 minuti a 37 °C. Successivamente, le cellule vengono diluite con il tampone sopra menzionato a una concentrazione di 5×10⁶ cellule/mL e incubate per 45 minuti a 37 °C. Successivamente, le cellule vengono diluite con il tampone sopra menzionato a una concentrazione finale di 0,5 × 10⁶ cellule/mL e centrifugate a 250 g per 10 minuti a 20 °C. Le cellule vengono sospese a 1,0 × 10⁶ cellule/mL nel tampone sopra menzionato e mantenute a 20 °C fino alla misurazione. Le cellule HL-60 vengono utilizzate per un massimo di 4 ore dopo il caricamento con fura-2/AM e sospese in 2 mL del tampone sopra menzionato, utilizzando cuvette di fluorescenza in acrilico. Le cellule HL-60 vengono incubate per 3 minuti a 37 °C, in presenza di 1 mM Ca²⁺ e varie concentrazioni di Clemastine Fumarato, prima dell'aggiunta di istamina (100 μM). La fluorescenza viene determinata a 37 °C, con agitazione costante delle cellule a 1×10³ rpm, utilizzando uno spettrofluorimetro Ratio II. La fluorescenza basale ([Ca²⁺]_i basale) viene misurata per 1 minuto. I valori di [Ca²⁺]_i basale vengono sottratti dai corrispondenti valori di picco [Ca²⁺]_i, per calcolare l'aumento di [Ca²⁺]_i. Le lunghezze d'onda di eccitazione ed emissione sono rispettivamente 340 e 500 nm. Il valore di IC50 è valutato dalla curva competitiva.

• Modelli animali

  Male Wistar rats with paw oedema induced by subplantar injection of zymosan and ear oedema induced by croton oil

• Dosaggi

  5-20 mg/kg

• Somministrazione

  Intraperitoneally