Chelerythrine Chloride (NSC 646662)

Il cloruro di cheleritrina (NSC 646662) interagisce con il dominio catalitico della PKC, è un inibitore competitivo rispetto all'accettore di fosfato (istone IIIS) con un valore Ki di 0,7 μM e un inibitore non competitivo rispetto all'ATP. Mostra potenti effetti citotossici contro le cellule L-1210 con IC50 di 0,53 μM. Questo composto non altera alcuna attività di PKA, TPK e Ca/CM-PK, e il suo effetto inibitorio sull'attività della PKC non varia tra i vari substrati inclusi GS, MLC, MBP e Fibrinogeno. [1] Inibisce l'attività della PKC in estratti cellulari grezzi da cellule SQ-20B in modo dose-dipendente. La cheleritrina diminuisce la vitalità cellulare, determinata dal saggio MTT, in modo dose-dipendente nelle cellule SCC35, JSQ3, SQ20B e SCC61. [2] A 5 μM, sopprime l'espressione indotta dal VEGF di ICAM-1, VCAM-1 ed E-selectina nelle HUVEC. Sopprime anche l'attività di NF-κB indotta dal VEGF nelle HUVEC alla stessa concentrazione e sopprime l'adesività leucocitaria basale e indotta dal VEGF nelle HUVEC. [3] A concentrazioni di 6 mM-30 mM, induce rapidamente picnosi, restringimento e successiva morte cellulare nei miociti cardiaci. La morte dei miociti indotta dalla cheleritrina (30 μM) è accompagnata da frammentazione nucleare e attivazione di caspasi-3 e -9 in colture primarie di miociti ventricolari di ratto neonatale. A 10 μM, provoca il rilascio di citocromo c dai mitocondri, suggerendo che le ROS mediano il rilascio di citocromo c indotto dalla cheleritrina nei miociti cardiaci. [4] Sposta il peptide del dominio BH3 fluorescentemente marcato da una proteina di fusione ricombinante GST-BcLXL con IC50 di 1,5 μM. A 2,5 μM e 5 μM per 16 ore, induce una sostanziale diminuzione del potenziale mitocondriale come indicato da un aumento della fluorescenza verde di JC-1 nelle cellule di neuroblastoma umano SH-SY5Y. A 5 μM, induce anche la comparsa di DNA sub-G1, indicativo di apoptosi nelle cellule SH-SY5Y. A 10 μM, induce un cambiamento del potenziale mitocondriale, il rilascio di CytC dai mitocondri nelle cellule SH-SY5Y. [5]

Il cloruro di cheleritrina (NSC 646662) (5 mg/kg i.p.) determina un ritardo nella crescita tumorale in topi portatori di xenotrapianti SQ-20B. [2] Il trattamento con questo composto (5 mg/kg) aumenta significativamente i nuclei TUNEL-positivi nel miocardio, così come le forme clivate di caspasi-3 e -9 nel ratto adulto. [4]

• saggio per la proteina chinasi C

  La proteina chinasi C purificata è preparata dal cervello di ratto. Brevemente, la miscela di incubazione (200 μL) contiene 20 mM di tampone Tris/HCl (pH 7.5), 10 mM di MgCl₂, 200 μg/mL di istoni, micelle preparate con 700 μM di fosfatidilserina e 180 μM di 1,2-dioleina in 0,3% di triton X100, 0,2 mM di CaCl₂, 100 μM di ATP, [γ-³²P ]-ATP (10⁵ dpm), Chelerythrine Chloride (NSC 646662) da testare (solubilizzato in dimetilsolfossido) e l'enzima (0,5 μg di proteina). Dopo l'incubazione a 30°C per 3 minuti, la reazione viene terminata con l'aggiunta di 3 mL di acido tricloroacetico al 20%. I materiali precipitabili acidi vengono raccolti su filtri Whatman GFE e lavati abbondantemente con acido tricloroacetico al 20% ghiacciato. La radioattività sui filtri viene misurata utilizzando un contatore a scintillazione liquida. L'attività della proteina chinasi C viene corretta per l'attività non specifica mediante saggio in assenza di micelle e CaCl₂.

• Linee cellulari

  L-1210 cells

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  2 days

• Metodo

  The lymphocytic mouse leukemia L1210 cells are plated sparsely at 1×10⁴ cells per well in 24-well cluster plates in RPMI 1640 medium containing 10% foetal calf serum, 4 mM glutamine, 100 U/mL penicillin, 100 pg/mL streptomycin sulphate and Chelerythrine Chloride (NSC 646662) to be tested (solubilized in dimethylsulphoxyde ). After a 2 day incubation period at 37 ℃ in a humidified atmosphere (5% CO₂ in air), growth is monitored by counting cell numbers in a coulter-counter. IC50 values are calculated on the basis of the linear regression lines established for this compound.

• Modelli animali

  mice bearing SQ-20B xenografts

• Dosaggi

  5 mg/kg

• Somministrazione

  Intraperitoneal injection