Lexibulin (CYT997)

N. catalogoS2195 Lotto:S219502

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Dati tecnici

Formula

C24H30N6O2
Peso molecolare 434.53 Numero CAS 917111-44-5
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 86 mg/mL (197.91 mM)
Ethanol 86 mg/mL (197.91 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 4.3mg/ml (9.90mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 86 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 0.61mg/ml (1.40mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 12.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Lexibulin (CYT997, SRI-32007) è un potente inibitore della polimerizzazione dei microtubule con un IC50 di 10-100 nM nelle linee cellulari tumorali. Questo composto è in fase 2.
Target
Microtubules (cancer cell lines)
10 nM-100 nM
In vitro Il trattamento con Lexibulin (CYT997) (1 μM) per 24 ore in cellule A549 induce una rapida riorganizzazione dei microtubuli, inclusa la distruzione della rete microtubulare esistente e l'accumulo di tubulina in placche all'interno del citoplasma di alcune cellule, portando a significative alterazioni della morfologia cellulare, inclusa la perdita di adesione e l'arrotondamento cellulare. Mostra una potente attività citotossica contro una gamma di 16 cellule tumorali con IC50 che vanno da 9 nM per HepG2 a 101 nM per KHOS/NP. In particolare, questo composto mostra una potente attività contro le cellule HCT15, note per possedere il meccanismo di resistenza multidrug Pgp (MDR+), con un IC50 di 52 nM. Attraverso l'inibizione della polimerizzazione dei microtubuli, blocca il ciclo cellulare al confine G2-M e induce un aumento del Bcl-2 fosforilato e una maggiore espressione della ciclina B1, nonché l'attivazione della caspasi-3 e la generazione di poli (ADP-ribosio) polimerasi. Il suo trattamento provoca un aumento rapido e reversibile della permeabilità dei monostrati di HUVEC con un IC50 di ~80 nM a 1 ora di esposizione. In linea con l'interruzione della tubulina cellulare, inibisce potentemente la proliferazione, induce l'arresto del ciclo cellulare e, cosa più importante, l'apoptosi di entrambe le linee cellulari di mieloma umano (HMCL) e delle cellule MM primarie.
In vivo L'emivita di Lexibulin (CYT997) per somministrazione orale (2,5 ore) nei ratti è leggermente più lunga rispetto a quella per somministrazione endovenosa (1,5 ore), con una biodisponibilità orale assoluta del 50% al 70%. La somministrazione orale di questo composto induce un'inibizione dose-dipendente della crescita tumorale di xenotrapianti PC3 nei topi, in modo più potente rispetto al paclitaxel. È anche efficace in un modello singenico ortotopico che utilizza le cellule di cancro al seno murino 4T1, che sono in parte refrattarie al trattamento con paclitaxel. Una singola dose di CYT997 (7,5 mg/kg, i.p.) riduce significativamente il flusso sanguigno tumorale a 6 ore nelle metastasi epatiche, in misura simile al controllo positivo CA4P dosato a 100 mg/kg. Il trattamento con questo composto (15 mg/kg/die) prolunga significativamente la sopravvivenza in un modello murino di mielomatosi sistemica aggressiva.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggio turbidimetrico per la polimerizzazione della tubulina

    L'effetto di Lexibulin (CYT997) sulla polimerizzazione del microtubule viene determinato utilizzando un saggio turbidimetrico convenzionale con tubulina neuronale bovina, in cui l'assemblaggio del microtubule è monitorato da un aumento dell'assorbanza a 340 nm. Concentrazioni crescenti di questo composto vengono aggiunte a 100 μL di tubulina/GTP/glicerolo. I saggi turbidimetrici di assemblaggio del microtubule vengono eseguiti incubando la proteina del microtubule bovina in cuvette a 37 °C in uno spettrofotometro termoregolato, misurando il cambiamento dell'assorbanza a 340 nm nel tempo in tampone PEM [80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA e 5% di glicerolo].
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, and K562

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

  • Tempo di incubazione

    ~72 hours

  • Metodo

    Cells are exposed to various concentrations of Lexibulin (CYT997) for ~72 hours. Cell proliferation is assessed with either the Alamar blue or MTT assays. For MTT assays, 5 mg/mL of MTT is added to all wells, plates are incubated for 6 hours at 37 °C, and then lysis buffer is added (10% SDS in 0.01 N HCl) and absorbance is measured at 620 nm in a BMG Technologies Lumistar or Polarstar plate reader. For Alamar blue assays, Alamar blue (10 μL/well) is added to each well and the plates are incubated at 37 °C for 4 hours. The fluorescence is then measured using a fluorescence plate reader with an excitation filter at 544 nm and an emission filter at 590 nm. For cell cycle analysis, cells are fixed and permeabilized with 70% ethanol in PBS and incubated at 4 °C overnight. RNase-treated samples (10 μg RNase/mL for 20 minutes at 37 °C) are stained with propidium iodide (5 μg/mL) at 4 °C for a minimum of 10 minutes. Cell cycle variables are determined by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis using a Beckman-Coulter Quanta SC MPL system and analyzed using CXP Software. For apoptosis analysis, cells are detached and collected. Annexin staining is done using the Vybrant Apoptosis Assay Kit. Cells are stored on ice and analyzed on a Beckman Coulter Quanta MPL within 1 hour of preparation. Annexin V–positive cells are determined using two-channel analysis.
Studio sugli animali:[1]
  • Modelli animali

    Male nude mice inoculated s.c. with PC3 cells, and female BALB/c mice inoculated with 4T1 cells

  • Dosaggi

    ~30 mg/kg/day

  • Somministrazione

    Oral gavage thrice a day

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19887548/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19907921/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>CYT997 inhibits cellular proliferation in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. Cell viability was measured by a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in 96-well plates in the presence of increasing concentrations of CYT997 for 24 h.The results represent the mean ?SD of four replicates.</p>

Dati da [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>CYT997 induces apoptosis in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. HL-60 cells were treated with CYT997 (0, 50, 100, and 200 nM) for 24 h, resuspended in propidium iodide (PI)-containing hypotonic buffer, and then the percentage of apoptotic cells was analyzed by flow cytometry.</p>

Dati da [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Activation of caspases by CYT997. (A) Immunoblotting analysis for caspase-9, -8 and -3 and poly ADP-ribose polymerase (PARP), was performed in lysates of HL-60 cells treated with CYT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. (B) Annexin V-propidium iodide (PI) staining was performed to quantify phospha- tidylserine externalization in HL-60 cells treated with CYT997 (200 nM) or untreated for 24 h, in the presence or absence of the caspase-8 inhibitor. * P<0.05.</p>

Dati da [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Effects of CYT997 on the cell cycle. HL-60 cells were treated with CT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. The cell cycle was analyzed using propidium iodide (PI) staining followed by flow cytometry analysis.</p>

Dati da [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

Sellecks Lexibulin (CYT997) È stato citato da 8 Pubblicazioni

A modular master regulator landscape controls cancer transcriptional identity [ Cell, 2021, 184(2):334-351.e20] PubMed: 33434495
HBV Core Promoter Inhibition by Tubulin Polymerization Inhibitor (SRI-32007) [ Adv Virol, 2020, 2020:8844061] PubMed: 33110426
CYT997(Lexibulin) induces apoptosis and autophagy through the activation of mutually reinforced ER stress and ROS in osteosarcoma [ J Exp Clin Cancer Res, 2019, 38(1):44] PubMed: 30704503
Intracellular reduction in ATP levels contributes to CYT997-induced suppression of metastasis of head and neck squamous carcinoma. [ J Cell Mol Med, 2019, 23(2):1174-1182] PubMed: 30450674
Survival of midbrain dopamine neurons depends on the Bcl2 factor Mcl1 [ Cell Death Discov, 2018, 4:107] PubMed: 30479840
Augmentation of the anticancer activity of CYT997 in human prostate cancer by inhibiting Src activity. [ J Hematol Oncol, 2017, 10(1):118] PubMed: 28606127
Structures of a diverse set of colchicine binding site inhibitors in complex with tubulin provide a rationale for drug discovery. [ FEBS J, 2016, 283(1):102-11] PubMed: 26462166
The microtubule depolymerizing agent CYT997 effectively kills acute myeloid leukemia cells via activation of caspases and inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway proteins. [XIAOHUI CHEN, et al. Exp Ther Med, 2013, 6(2):299-304] PubMed: 24137178

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