CP-466722

N. catalogoS2245 Lotto:S224501

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Dati tecnici

Formula

C₁₇H₁₅N₇O₂

Peso molecolare

349.35

Numero CAS

1080622-86-1

Solubilità (25°C)*

In vitro

4-Methylpyridine (riscaldato con bagno dacqua a 50 ºC)

5 mg/mL (14.31 mM)

DMSO

0.28 mg/mL (0.8 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Clear solution

5%4-Methylpyridine 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

0.1mg/ml (0.29mM)

Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified 4-Methylpyridine stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

CP-466722 è un potente e reversibile inibitore di ATM, non influenza ATR e inibisce i membri della famiglia PI3K o PIKK nelle cellule.

Target

ATM

410 nM

In vitro

In vitro, CP-466722 è identificato come un potenziale inibitore per diminuire l'attività della chinasi ATM purificata per fosforilare il substrato GST-p53(1–101). Inoltre, questo composto mostra anche attività inibitorie contro le chinasi abl e src. Nelle cellule HeLa, questo composto a dosi di 6μM, porta all'inibizione della fosforilazione ATM-dipendente inibendo reversibilmente l'attività della chinasi ATM indotta da radiazioni ionizzanti (IR). Inoltre, l'induzione di p53 ATM-dipendente è anche inibita da questa sostanza chimica nelle cellule di cancro al seno umano MCF-7 e nei fibroblasti umani diploidi primari e immortalizzati. In risposta a IR, questo composto ha aumentato la proporzione di cellule con contenuto di DNA G2/M e ridotto la proporzione di cellule con contenuto di DNA in fase G1 nelle cellule HeLa. L'esposizione transitoria a questa sostanza chimica per un periodo di 4 ore sensibilizza le cellule HeLa a IR senza influenzare la placcatura cellulare né la vitalità cellulare.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggi chinasici in vitro Per lo screening di inibitori a piccole molecole dell'attività della chinasi ATM, viene adattato un saggio chinasico in vitro e sviluppato un saggio ELISA che misura lo stato di fosforilazione del bersaglio a valle di ATM, p53. GST-p53(1-101) ricombinante e ATM e ATR a lunghezza intera con tag Flag vengono purificati per l'uso nei saggi ELISA e nei saggi chinasici in vitro. Brevemente, le piastre Nunc 96 pozzetti Maxisorp vengono rivestite durante la notte (4 °C) con 2 μg di GST-p53(1-101) ricombinante purificata in PBS. Tutte le incubazioni successive vengono eseguite a temperatura ambiente. Le piastre vengono lavate (0,05% v/v-Tween/PBS) prima dell'aggiunta di chinasi ATM ricombinante a lunghezza intera purificata (30 ng–60 ng) in un volume finale di 80 μL di tampone di reazione (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT e 1 μM ATP) in presenza o assenza di CP-466722. Questo composto (10 μM) viene aggiunto alle piastre in duplicato e il saggio chinasico viene incubato (90 minuti). Le piastre vengono lavate (0,05% v/v-Tween/PBS), bloccate (1 ora, 1% p/v-BSA/PBS) e risciacquate prima che l'anticorpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 (1:1000/PBS) venga aggiunto alle piastre e incubato (1 ora). Per ridurre il legame non specifico, le piastre vengono lavate (0,05% v/v-Tween/PBS) prima dell'incubazione (1 ora) con anticorpo secondario IgG di capra anti-coniglio coniugato con HRP (1:5000/PBS). L'anticorpo secondario legato alla proteina GST-p53(1–101) fosforilata viene rilevato con reagente substrato TMB. Le piastre vengono sviluppate (15 minuti–30 minuti) e la reazione viene arrestata (concentrazione finale di 1 M H₂SO₄) prima che l'assorbanza venga determinata (λ450nm). Questo composto che inibisce l'attività della chinasi ATM nei saggi ELISA, è caratterizzato rispetto all'inibizione delle chinasi ATM/ATR utilizzando saggi chinasici in vitro. Il Western blotting utilizzando l'anticorpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 viene utilizzato come lettura dell'inibizione di ATM/ATR. Un'analisi estesa di questa sostanza chimica (10 μM) contro un pannello di chinasi disponibile in commercio viene eseguita da Upstate.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari HeLa and A-T Concentrazioni 0-6 μM Tempo di incubazione 4 hours Metodo HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggi chinasici in vitro
Per lo screening di inibitori a piccole molecole dell'attività della chinasi ATM, viene adattato un saggio chinasico in vitro e sviluppato un saggio ELISA che misura lo stato di fosforilazione del bersaglio a valle di ATM, p53. GST-p53(1-101) ricombinante e ATM e ATR a lunghezza intera con tag Flag vengono purificati per l'uso nei saggi ELISA e nei saggi chinasici in vitro. Brevemente, le piastre Nunc 96 pozzetti Maxisorp vengono rivestite durante la notte (4 °C) con 2 μg di GST-p53(1-101) ricombinante purificata in PBS. Tutte le incubazioni successive vengono eseguite a temperatura ambiente. Le piastre vengono lavate (0,05% v/v-Tween/PBS) prima dell'aggiunta di chinasi ATM ricombinante a lunghezza intera purificata (30 ng–60 ng) in un volume finale di 80 μL di tampone di reazione (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT e 1 μM ATP) in presenza o assenza di CP-466722. Questo composto (10 μM) viene aggiunto alle piastre in duplicato e il saggio chinasico viene incubato (90 minuti). Le piastre vengono lavate (0,05% v/v-Tween/PBS), bloccate (1 ora, 1% p/v-BSA/PBS) e risciacquate prima che l'anticorpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 (1:1000/PBS) venga aggiunto alle piastre e incubato (1 ora). Per ridurre il legame non specifico, le piastre vengono lavate (0,05% v/v-Tween/PBS) prima dell'incubazione (1 ora) con anticorpo secondario IgG di capra anti-coniglio coniugato con HRP (1:5000/PBS). L'anticorpo secondario legato alla proteina GST-p53(1–101) fosforilata viene rilevato con reagente substrato TMB. Le piastre vengono sviluppate (15 minuti–30 minuti) e la reazione viene arrestata (concentrazione finale di 1 M H₂SO₄) prima che l'assorbanza venga determinata (λ450nm). Questo composto che inibisce l'attività della chinasi ATM nei saggi ELISA, è caratterizzato rispetto all'inibizione delle chinasi ATM/ATR utilizzando saggi chinasici in vitro. Il Western blotting utilizzando l'anticorpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 viene utilizzato come lettura dell'inibizione di ATM/ATR. Un'analisi estesa di questa sostanza chimica (10 μM) contro un pannello di chinasi disponibile in commercio viene eseguita da Upstate.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
HeLa and A-T
Concentrazioni
0-6 μM
Tempo di incubazione
4 hours
Metodo
HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794134/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24464432/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Dati da [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Dati da [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

: Dati da [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

Sellecks CP-466722 È stato citato da 11 Pubblicazioni

Loss of N-Glycanase 1 Alters Transcriptional and Translational Regulation in K562 Cell Lines [ G3 (Bethesda), 2020, 4;10(5):1585-1597]	PubMed: 32265286
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
An Anticancer Drug Cocktail of Three Kinase Inhibitors Improved Response to a Dendritic Cell-Based Cancer Vaccine [ Cancer Immunol Res, 2019, 7(9):1523-1534]	PubMed: 31266784
Upregulation of long noncoding RNA SNHG20 promotes cell growth and metastasis in esophageal squamous cell carcinoma via modulating ATM-JAK-PD-L1 pathway [ J Cell Biochem, 2019, 10.1002/jcb.28444]	PubMed: 30767270
Alleviation of Senescence via ATM Inhibition in Accelerated Aging Models. [ Mol Cells, 2019, 42(3):210-217]	PubMed: 30726661
ATM‑JAK‑PD‑L1 signaling pathway inhibition decreases EMT and metastasis of androgen‑independent prostate cancer. [ Mol Med Rep, 2018, 17(5):7045-7054]	PubMed: 29568923
Simultaneous targeting of ATM and Mcl-1 increases cisplatin sensitivity of cisplatin-resistant non-small cell lung cancer [ Cancer Biol Ther, 2017, 18(8):606-615]	PubMed: 28686074
Monitoring the Activation of the DNA Damage Response Pathway in a 3D Spheroid Model. [Mondesert O, et al. PLoS One, 2015, 10(7):e0134411]	PubMed: 26225756
ATM inhibitor KU-55933 increases the TMZ responsiveness of only inherently TMZ sensitive GBM cells. [Nadkarni A, et al. J Neurooncol, 2012, 110(3):349-57]	PubMed: 23054561

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