Canertinib (CI-1033)

Canertinib (CI-1033) mostra un'eccellente potenza per l'inibizione irreversibile dell'autofosforilazione di erbB2 nelle cellule MDA-MB 453, e dimostra anche un'elevata permeabilità nelle cellule Caco-2. [1] Questo composto da solo sopprime significativamente l'Akt e la MAP chinasi costitutivamente attivate, e in combinazione inibisce Akt prevenendo l'aumento dei livelli di fosforilazione della MAPK. Stimola l'espressione di p27 e la fosforilazione di p38 nelle cellule MDA-MB-453. [2] CI-1033 è altamente specifico per la famiglia dei recettori erbB e non è sensibile a PGFR, FGFR o IR anche a 50 μM. Mostra alti livelli di inibizione nelle cellule A431 che esprimono EGFR con IC50 di 7,4 nM, e sopprime la fosforilazione tirosinica stimolata da heregulina di erbB2, erbB3 ed erbB4 con IC50 di 5, 14 e 10 nM, rispettivamente. Il composto inibisce anche l'espressione di pp62^c-fos in risposta a heregulina. [3] Si prevede che modifichi covalentemente Cys773 all'interno del sito di legame dell'ATP della chinasi HER2 e migliori la distruzione di entrambe le molecole ErbB-2 mature e immature. [4] Questo composto induce una significativa diminuzione della fosforilazione misurabile dei residui di tirosina 845 e 1068 di EGFR, che sono responsabili rispettivamente della segnalazione di Src e Ras/MAPK. I residui corrispondenti di Her-2, i residui di tirosina 877 e 1248 sono defosforilati significativamente da esso a una concentrazione di 3 μM o superiore. CI potrebbe bloccare l'internalizzazione di EGFR e aumentare il tasso di apoptosi nelle cellule di osteosarcoma primarie in modo titolabile. [5] Inoltre, inibisce significativamente la proliferazione delle cellule TT, TE2, TE6 e TE10 a 0,1 nM. [6]

Canertinib (CI-1033) mostra un'attività impressionante contro i xenotrapianti A431 in topi nudi a 5 mg/kg di peso corporeo. [1] Questo composto (da 20 a 80 mg/kg/giorno) raggiunge un alto grado di regressione tumorale nei modelli di xenotrapianto H125. [3] La sua somministrazione orale provoca una marcata inibizione della crescita nei xenotrapianti TT, TE6 e TE10 in topi nudi, senza morte animale e con <10% di perdita di peso. [6]

• Tyrosine Kinase Assays

  I saggi enzimatici per la determinazione dell'IC50 vengono eseguiti in piastre filtranti a 96 pozzetti in un volume totale di 0,1 mL, contenente 20 mM Hepes, pH 7,4, 50 mM vanadato di sodio, 10 μM di ATP contenente 0,5 mCi di [³²P]ATP, 20 mg di acido poliglutamico/tirosina, 10 ng di EGFR tyrosine kinase, e diluizioni appropriate di Canertinib (CI-1033). Tutti i componenti tranne l'ATP vengono aggiunti al pozzetto e la piastra viene incubata con agitazione per 10 min a 25 °C. La reazione viene avviata aggiungendo [³²P]ATP, e la piastra viene incubata a 25 °C per altri 10 min. La reazione viene terminata con l'aggiunta di 0,1 mL di acido tricloroacetico (TCA) al 20%. La piastra viene mantenuta a 4 °C per almeno 15 min per consentire al substrato di precipitare. I pozzetti vengono quindi lavati cinque volte con 0,2 mL di TCA al 10% e l'incorporazione di 32P viene determinata con un contatore di piastre Wallac β.

• Linee cellulari

  TT, TE2, TE6 and TE10 cells

• Concentrazioni

  0.1-5.0 nM

• Tempo di incubazione

  1, 3, 5 and 7 days

• Metodo

  Cells (1 × 10⁴) are seeded in each well of a 24-well plastic culture plate and left overnight in DMEM or RPMI-1640 supplemented with 10% FBS. The next morning, the cells are treated with the indicated concentrations of Canertinib (CI-1033) (0.1-5.0 nM) for varying periods (1, 3, 5 and 7 days). After treatment, the cells are counted using a Coulter counter. The percent of cell proliferation is calculated by this formula: treatment cell number/control cell number × 100 for each time period.

• Modelli animali

  A431 xenografts established in nude mice

• Dosaggi

  ~18 mg/kg

• Somministrazione

  Administered orally