In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Tosedostat (CHR2797) è un inibitore dell'aminopeptidasi per LAP, PuSA e Aminopeptidase N con IC50 rispettivamente di 100 nM, 150 nM e 220 nM, e non inibisce efficacemente PILSAP, MetAP-2, LTA4 hydrolase o MetAP-2. Fase 2.
Target
LAP
PuSA
Aminopeptidase N
100 nM
150 nM
220 nM
In vitro
CHR-2797 non ha quasi nessun effetto sull'attività di Aminopeptidase B, PILSAP, LTA4 hydrolase e MetAP-2 con valori IC50 rispettivamente di >1 uM, >5 uM, >10 uM e >30 uM. CHR-2797 viene convertito in un prodotto acido farmacologicamente attivo (CHR-79888) all'interno delle cellule, che mostra una significativa attività inibitoria nei confronti di LTA4 hydrolase con un IC50 di 8 nM. CHR-2797 esibisce profondi effetti antiproliferativi contro una serie di linee cellulari tumorali come U-937, HL-60, KG-1 e GDM-1 con valori IC50 rispettivamente di 10 nM, 30 nM, 15 nM e 15 nM, ma è inattivo contro HuT 78 e Jurkat E6-1 con valori IC50 di >10 uM. Non esiste una correlazione ovvia tra la sensibilità a CHR-2797 e lo stato mutazionale di p53, PTEN o K-Ras nelle cellule. CHR-2797 mostra selettività per le cellule trasformate (MrC5-SV2 o K-ras NRK) rispetto alle cellule non trasformate (MrC5 o NRK). Il trattamento con CHR-2797 (6 μM) porta alla sovraregolazione dei geni coinvolti nel trasporto degli amminoacidi e nelle vie metaboliche, alla fosforilazione del fattore di iniziazione eucariotico 2α, all'inibizione della fosforilazione dei substrati mTOR e alla ridotta sintesi proteica nelle cellule HL-60.
In vivo
La somministrazione di CHR-2797 (~100 mg/kg) diminuisce i volumi tumorali in vivo, rispetto ai controlli, in modo dose-risposta nel modello di colonizzazione polmonare di ratto HOSP.1, nel modello di colonizzazione epatica di condrosarcoma HSN LV10 di ratto, nel modello di metastasi spontanea del cancro al seno umano MDA-MB-435 e nel modello di xenotrapianto di cellule umane MDA-MB-468.
L'attività di LAP è determinata misurando l'idrolisi del tripeptide, LGG, che viene rilevata dal reagente di derivatizzazione OPA in presenza di β-mercaptoetanolo. Il test viene eseguito in piastre di saggio a 96 pozzetti. I pozzetti contengono CHR-2797 diluito (5 μL), 10 μg/mL di LAP (5 μL) e 40 μL di LGG 0,5 mM. La piastra viene agitata brevemente e incubata per 90 minuti a 37 °C. La reazione viene terminata con l'aggiunta di 200 μL di OPA/β-Mercaptoetanolo per pozzetto. La piastra viene letta sullo spettrofotometro Victor Wallac3: eccitazione, 355nm ed emissione, 460nm. L'attività di PuSA è determinata utilizzando il substrato fluorogenico Ala-AMC. La miscela di incubazione contiene CHR-2797 diluito (20 μL), substrato (125 μM Ala-AMC in tampone Tris-HCl 0,125 M, pH 7,5; 40 μL) ed enzima (40 μL). Dopo incubazione per 2 ore a 37 °C, la reazione viene interrotta con l'aggiunta di 100 μL di acido acetico al 3% (v/v). La fluorescenza viene misurata utilizzando un fluorimetro SLT Fluostar. L'Aminopeptidase N viene saggiata utilizzando il substrato fluorogenico, Ala-AMC. La miscela di incubazione contiene CHR-2797 diluito (20 μL), substrato (40 μL; concentrazione finale, 60 μM) ed enzima (40 μL, diluizione 1:8000) e viene incubata per 60 minuti a 37 °C prima dell'aggiunta di 100 μL di acido acetico al 3% (v/v), per arrestare la reazione. La fluorescenza viene misurata utilizzando un fluorimetro SLT Fluostar.
Cells are exposed to different concentrations of CHR-2797 for 72 hours. During the final 4 hours of this incubation, cells are pulsed with 0.4 μCi/well of [3H]thymidine (specific activity, 5 mCi/mmol), harvested onto GF/C glass fiber filter mats using a Tomtec harvester, and counted on a 1450 MicroBeta scintillation counter to determine the amount of [3H]thymidine incorporated into cellular DNA. Inhibition of the proliferation of human cancer cell lines is measured by [3H]thymidine incorporation.
Female rats (CBH/cbi) injected i.v. with HOSP.1P cells, male (CBH/cbi) rats injected with HSN LV10 cells, and nude mice (MF1 (nu/nu) inoculated with MDA-MB 435 cells or MDA-MB-468 cells
Dosaggi
~100 mg/kg
Somministrazione
Dosed daily p.o.
Riferimenti
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18701491/
Sellecks Tosedostat (CHR2797) È stato citato da 3 Pubblicazioni
Predicting effective pro-apoptotic anti-leukaemic drug combinations using co-operative dynamic BH3 profiling
[ PLoS One, 2018, 13(1):e0190682]
Response of Single Leukemic Cells to Peptidase Inhibitor Therapy Across Time and Dose Using a Microfluidic Device
[Kovarik ML ,et al. Integr Biol, 2014, 6(2):164-74]
Microfluidic chemical cytometry of peptide degradation in single drug-treated acute myeloid leukemia cells.
[Kovarik ML, et al. Anal Chem, 2013, 85(10):4991-7]
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