SKI-606 (Bosutinib)

Bosutinib è selettivo per Src rispetto alle chinasi non della famiglia Src con un IC50 di 1,2 nM e inibisce potentemente la proliferazione cellulare Src-dipendente con un IC50 di 100 nM. [1] Questo composto inibisce significativamente la proliferazione delle linee cellulari leucemiche Bcr-Abl-positive KU812, K562 e MEG-01 ma non Molt-4, HL-60, Ramos e altre linee cellulari leucemiche, con IC50 di 5 nM, 20 nM e 20 nM, rispettivamente, in modo più potente di STI-571. Similmente a STI-571, mostra attività antiproliferativa contro i fibroblasti trasformati da Abl-MLV con IC50 di 90 nM. Questo composto chimico abolisce la fosforilazione della tirosina di Bcr-Abl e STAT5 nelle cellule CML e di v-Abl espresso nei fibroblasti alla concentrazione di ~50 nM, 10-25 nM e 200 nM, rispettivamente, portando all'inibizione della segnalazione a valle di Bcr-Abl della fosforilazione di Lyn/Hck. [2] Sebbene incapace di inibire la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule di cancro al seno, diminuisce significativamente la motilità e l'invasione delle cellule di cancro al seno con IC50 di ~250 nM, coinvolta in un aumento dell'adesione cellula-cellula e della localizzazione di membrana della β-catenina. [3]

Bosutinib (60 mg/kg/giorno) è attivo contro xenotrapianti di fibroblasti trasformati da Src e xenotrapianti HT29 in topi nudi con T/C rispettivamente del 18% e del 30%. [1] La somministrazione orale di questo composto per 5 giorni sopprime significativamente la crescita tumorale K562 nei topi in modo dose-dipendente, con i tumori di grandi dimensioni eradicati a una dose di 100 mg/kg e senza tumori a 150 mg/kg senza tossicità evidente. [2] Essendo inattivo contro xenotrapianti Colo205 in topi nudi a 50 mg/kg due volte al giorno, la somministrazione di questo composto chimico a 75 mg/kg due volte al giorno è necessaria contro xenotrapianti Colo205, e l'aumento della dose di questo composto non ha alcun beneficio aggiuntivo, in contrasto con la significativa capacità dose-dipendente contro xenotrapianti HT29. [4]

• I saggi delle chinasi Src e Abl

  L'attività della chinasi Src è misurata in formato ELISA. Src (3 unità/reazione), tampone di reazione (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 0,1 mM EGTA, 0,5 mM Na₃VO₄) e peptide substrato cdc2 vengono aggiunti a varie concentrazioni di Bosutinib e incubati a 30 °C per 10 minuti. La reazione viene avviata con l'aggiunta di ATP a una concentrazione finale di 100 μM, incubata a 30 °C per 1 ora e arrestata con l'aggiunta di EDTA. Le istruzioni del produttore vengono seguite per i passaggi successivi. Il saggio della chinasi Abl viene eseguito in un formato di saggio di rilevamento DELFIA in fase solida a base di europio. Il peptide biotinilato (2 μM) è legato a piastre di microtitolazione rivestite di streptavidina per 1,5 ore in 1 mg/mL di ovoalbumina in PBS. Le piastre vengono lavate per 1 ora con PBS/0,1% Tween 80, seguito da un lavaggio con PBS. La reazione chinasica viene incubata per 1 ora a 30°C. La chinasi Abl (10 unità) viene miscelata con 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 80 μM EGTA, 100 μM ATP, 0,5 mM Na₃VO₄, 1% DMSO, 1 mM HEPES (pH 7,0), 200 μg/mL di ovoalbumina e varie concentrazioni di questo composto. La reazione viene arrestata con EDTA a una concentrazione finale di 50 mM. La reazione viene monitorata con anticorpo anti-fosfotirosina marcato con Eu e soluzione di potenziamento DELFIA.

• Linee cellulari

  Abl-MLV, Rat 2, KU812, K562, and MEG-01 cells

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cells are exposed to various concentrations of Bosutinib for 72 hours. Anchorage-independent proliferation of Abl-MLV-transformed fibroblasts is measured in 96-well ultra-low binding plates treated with Sigmacote to block residual cell attachment. Cell proliferation is measured with MTS or Cell-Glo. For the determination of cell cycle or cell death, cells are prepared for FACS analysis in the CycleTest Plus DNA reagent kit and analyzed on a fluorescence-activated cell sorter flow cytometer.

• Modelli animali

  Nude female mice injected with K562 cells

• Dosaggi

  ~150 mg/kg/day

• Somministrazione

  Oral gavage