Daclatasvir (BMS-790052)

N. catalogoS1482 Lotto:S148203

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Dati tecnici

Formula

C40H50N8O6
Peso molecolare 738.88 Numero CAS 1009119-64-5
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 148 mg/mL (200.3 mM)
Ethanol 148 mg/mL (200.3 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Daclatasvir (BMS-790052, EBP883) è un inibitore altamente selettivo di HCV NS5A con EC50 di 9-50 pM, per un'ampia gamma di genotipi di replicone di HCV e il virus infettivo JFH-1 genotipo 2a in coltura cellulare. Fase 3.
Target
HCV NS5A
9 pM-50 pM(EC50)
In vitro Daclatasvir (BMS-790052) è uno degli inibitori più potenti della replicazione dell'HCV riportati finora. I valori medi di EC50 di questo composto sono 50 e 9 pM per i repliconi di HCV genotipo 1a e 1b, rispettivamente. Mostra un indice terapeutico (CC50/EC50) di almeno 105 ed è inattivo nei confronti di un panel di 10 virus a RNA e DNA, con EC50 superiori a 10 μM. Ciò conferma la sua specificità per l'HCV. Nelle cellule Huh7 che ospitano i repliconi di HCV genotipo 1b, blocca sia la replicazione transitoria che stabile del genoma dell'HCV, con valori di EC50 che vanno da 1-15 pM. A concentrazioni di 100 pM o 1 nM, è stato dimostrato che altera la localizzazione subcellulare e il frazionamento biochimico di NS5A. Questo composto inibisce i repliconi ibridi contenenti i geni NS5A del genotipo 4 dell'HCV con EC50 di 7-13 pM. Il residuo 30 di NS5A è un sito importante per la resistenza mediata da BMS-790052 nei repliconi ibridi.
Caratteristiche Inibitore di prima classe, altamente selettivo della NS5A del virus dell'epatite C (HCV) con valori di EC50 picomolati.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[4]
  • Saggio FRET per inibitori di HCV NS5A

    Questo peptide (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS]-Glu-Glu-Abu-[COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL]-NH2) contiene un donatore fluorescente {EDANS, acido 5-[(2-amminoetil)ammino]naftalene-1-solfonico} vicino a un'estremità e un accettore {DABCYL, acido 4-[(4-dimetilammino)fenil]azo}benzoico} vicino all'altra estremità. Il trasferimento di energia di risonanza intermolecolare tra il donatore e l'accettore spegne la fluorescenza del peptide, ma quando la Protease NS3 scinde il peptide, i prodotti vengono rilasciati dallo spegnimento del trasferimento di energia di risonanza. La fluorescenza del donatore aumenta nel tempo man mano che più substrato viene scisso dalla Protease NS3. I reagenti di rilevamento sono: reagente di lisi di coltura cellulare di luciferasi 5× diluito con dH2O a 1×, con aggiunta di NaCl (150 mM) e peptide FRET (20 μM). Le cellule HCV-Huh-7 sono state poste in piastre a 96 pozzetti e lasciate aderire durante la notte (1×104 cellule per pozzetto). Il giorno successivo, Daclatasvir (BMS-790052) è stato aggiunto ai pozzetti e le piastre sono state incubate per 72 ore. Le piastre sono state quindi risciacquate con PBS e il saggio FRET è stato eseguito aggiungendo 30 μL del suddetto reagente di rilevamento del peptide FRET a ciascun pozzetto. I segnali sono stati acquisiti utilizzando uno strumento Cytofluor 4000, impostato in modalità automatica a 340 nm (eccitazione)/490 nm (emissione), eseguito per 20 cicli o meno, e leggendo le piastre in modalità cinetica. Dopo il saggio FRET, sono stati aggiunti 40 μL di substrato di luciferasi a ciascun pozzetto e l'attività della luciferasi è stata misurata.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    HCV replicon cells (Huh7)

  • Concentrazioni

    0.1 pM - 50 μM, dissolved in DMSO (the final concentration of DMSO is 0.5%)

  • Tempo di incubazione

    72 hours

  • Metodo

    Daclatasvir (BMS-790052) is added to 96-well plates containing HCV replicon cells seeded approximately 12 hours before in 200 µL media. The cell plates are tested for replication activity and cytotoxicity after 72 hours of incubation. Cytotoxicity is measured with CellTiter-Blue, after which the media and dye are removed, plates are inverted and the remaining liquid is blotted with paper towels. Replication activity of the HCV genotype 1a cell lines is quantified using Renilla luciferase. 1× Renilla luciferase lysis buffer (30 µL) is added to each well and plates are incubated with gentle shaking for 15 min. Renilla luciferase substrate (40 µL) is then added and the signals are detected using a Top Count luminometer set for light emission quantification. One hundred per cent activity is calculated for each cell line for the DMSO-only wells; percentage activity is calculated for each concentration of the inhibitor by dividing the average value for wells containing this compound by the average value for wells containing DMSO.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20410884/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21513964/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22203595/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15793110/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>The toxicity of BMS-790052 (BMS) and Telaprevir (TPV) was measured by seeding 96-well plates to 70% confluence and exposing the cells to up to 50 μM of compound for 72 hours. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was added to each well at a final concentration of 500 μg/ml 4 h before dissolving crystals in 100 μl of DMSO and measuring at 550 nm UV wavelengths. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was then calculation using the OD550 value and the following formula: log CC50=log concentration of HPP-[(HPP-50)/(HPP-LPP)×log d HPP: highest protective percentage closest to 50% LPP: Lowest protective percentage closest to 50% d: dilution factor</p>

, 2011 , Dr. Julie Sheldon,Dr Esteban Domingo and Dr Celia Perales

<p>Huh7.5 cells were infected with JFH-1 (2a) strain. Once the cells reached 80% infectivity they were treated with pMconcentration of BMS790052 for two different time points. Cells were collected in SDS sample loading buffer and probed for NS5A and GAPDH. After 16hrs hyperphosphorylated NS5A disappeared with increasing concentration of the drug. 40hrs of treatment resulted complete disappearance of NS5A. GAPDH is internal control.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

<p>80% infected HCV JFH-1 cells were treated with several concentrations of BMS790052 in pMrange. Cells were fixed after 16hrs and NS5A was probed.Cells treated with BMS790052 shows NS5A present in clusters compared to an even cytoplasmic distribution in untreated cells.</p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

Sensitivity of PR63cc to the combinatory treatment with asunaprevir and daclatasvir. Huh7.5.1 cells infected with PR63cc or JFH1 at an MOI of 0.05 for 3 days were treated with either asunaprevir, daclatasvir or in combination for another 3 days. 40 nM asunaprevir and 0.05 nM daclatasvir, approximately the EC50 concentration of the each inhibitor for JFH1, were used. The antiviral efficiency of each compound was evaluated by quantifying the intracellular HCV RNA by RT-qPCR. Data were expressed as the percentage of mock treatment control. The error bars were calculated from two independent experiments. ns, P > 0.05. *, P < 0.05.

Dati da [ , , Antiviral Res, 2017, 139:18-24 ]

Sellecks Daclatasvir (BMS-790052) È stato citato da 58 Pubblicazioni

Rapid hepatitis C virus replication machinery removal after antiviral treatment with DAA monitored by multimodal imaging [ Structure, 2025, S0969-2126(25)00193-5] PubMed: 40553718
Hepatitis C virus-induced differential transcriptional traits in host cells after persistent infection elimination by direct-acting antivirals in cell culture [ J Med Virol, 2024, 96(7):e29787] PubMed: 38988177
Antiviral drugs prolong survival in murine recessive dystrophic epidermolysis bullosa [ EMBO Mol Med, 2024, 16(4):870-884] PubMed: 38462666
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Unraveling the dynamics of hepatitis C virus adaptive mutations and their impact on antiviral responses in primary human hepatocytes [ J Virol, 2024, e0192123.] PubMed: 38319104
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
Hepatitis C virus cell culture adaptive mutations enhance cell culture propagation by multiple mechanisms but boost antiviral responses in primary human hepatocytes [ bioRxiv, 2023, 2023.11.22.568224] PubMed: 38045248
Combination of antiviral drugs inhibits SARS-CoV-2 polymerase and exonuclease and demonstrates COVID-19 therapeutic potential in viral cell culture [ Commun Biol, 2022, 5(1):154] PubMed: 35194144
Going Viral: An Investigation into the Chameleonic Behaviour of Antiviral Compounds [ Chemistry, 2022, e202202798.] PubMed: 36286339
Correlation of hepatitis C virus-mediated endoplasmic reticulum stress with autophagic flux impairment and hepatocarcinogenesis [ Med Mol Morphol, 2021, 10.1007/s00795-020-00271-5] PubMed: 33386512

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