BMS-777607

BMS-777607 è un inibitore selettivo della chinasi Met, competitivo per l'ATP, che blocca potentemente l'autofosforilazione di c-Met con IC50 di 20 nM in lisati cellulari GTL-16, e dimostra un'inibizione selettiva della proliferazione in linee cellulari tumorali Met-dipendenti, come la linea cellulare GTL-16, H1993 e U87. [1] Questo composto inibisce l'autofosforilazione di c-Met innescata dal fattore di crescita degli epatociti (HGF) con IC50 di <1 nM nelle cellule di cancro alla prostata PC-3 e DU145. Questo composto ha scarso effetto sulla crescita delle cellule tumorali, ma esibisce un effetto inibitorio sulla dispersione cellulare indotta da HGF nelle cellule PC-3 e DU145, con un'inibizione quasi completa a 0,5 μM. Sopprime anche la migrazione e l'invasione cellulare stimolate in modo dose-dipendente (IC50 < 0,1 μM) in entrambe le linee cellulari. [2] L'applicazione di questo composto (~10 μM) alle cellule murino KHT altamente metastatiche per 2 ore elimina potentemente i livelli basali di c-Met autofosforilato con IC50 di 10 nM senza influenzare il c-Met totale, portando a un'inibizione dose-dipendente della fosforilazione delle molecole di segnalazione a valle, tra cui ERK, Akt, p70S6K e S6. Il trattamento con questo composto (~1 μM) per 24 ore inibisce potentemente la dispersione, la motilità e l'invasione delle cellule KHT a dosi nell'intervallo nanomolare, il che concorda con il "knockdown" del gene MET, e influenza modestamente la proliferazione cellulare e la formazione di colonie. [3]

La somministrazione orale di BMS 777607 (6,25-50 mg/kg) riduce significativamente i volumi tumorali degli xenotrapianti tumorali umani GTL-16 in topi atimici senza tossicità osservata. [1] La somministrazione di questo composto (25 mg/kg/giorno) diminuisce il numero di noduli tumorali polmonari KHT (28,3%), migliora l'emorragia morfologica e compromette significativamente il fenotipo metastatico in topi C3H/HeJ femmine di 6-8 settimane iniettati con cellule di fibrosarcoma di roditore KHT senza apparente tossicità sistemica rispetto al trattamento di controllo. Una bassa dose di questo composto chimico (10 mg/kg) offre anche un'inibizione lieve ma non significativa della formazione di noduli polmonari rispetto al controllo veicolo. [3]

• Saggio della chinasi Met

  La reazione chinasica consiste in GST-Met espressa da baculovirus, 3 μg di poli(Glu/Tyr), 0,12 μCi di ³³P γ-ATP, 1 μM di ATP in 30 μL di tampone chinasico (20 mM Tris-Cl, 5 mM MnCl2, 0,1 mg/mL BSA, 0,5 mM DTT). Le reazioni vengono incubate per 1 ora a 30 °C e interrotte dall'aggiunta di acido tricloroacetico (TCA) freddo a una concentrazione finale dell'8%. I precipitati di TCA vengono raccolti su piastre unifiltro GF/C utilizzando un raccoglitore universale Filtermate, e i filtri vengono quantificati utilizzando un contatore a scintillazione liquida TopCount a 96 pozzetti. Vengono generate curve dose-risposta per determinare la concentrazione richiesta per inibire il 50% della fosforilazione del substrato (IC50). Questo composto viene disciolto a 10 mM in DMSO e valutato a 10 concentrazioni, in duplicato.

• Linee cellulari

  Rodent fibrosarcoma KHT cells

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO as a stock solution (10 mM), final concentration ~10 μM.

• Tempo di incubazione

  2, 24 and 96 hours

• Metodo

  KHT cells are exposed to serial dilution of BMS 777607 for 96 hours, then the MTT assay and trypan blue exclusion are used for the determination of cell proliferation and cell death, respectively. KHT cell colonies are incubated with this compound for 24 hours and then stained with crystal violet (0.1%) and photographed for the assessment of cell scattering. 2 mm scratch on the confluent KHT cell monolayer is made using a sterilized 1 ml pipette tip followed by treated with this compound for 24 hours, then the number of cells that have migrated into the denuded area is counted on 4 random fields for the evaluation of cell migration. For the examination of cell invasion, the commercial transwell inserts (8 μm pore membrane) pre-loaded with Matrigel are incubated with serum-free medium in the presence or absence of this compound at 37 °C for 2 hours to allow rehydration of Matrigel. Then cells suspended in serum-free medium are loaded onto the top chamber (5 × 10³/insert) and complete medium (containing 10% FBS) is used in the lower chamber as a chemoattractant. After incubation for 24 hours, the Matrigel is removed and the inserts are stained with crystal violet. Invaded cells on the underside of the filter are photographed and counted.

• Modelli animali

  Rodent fibrosarcoma KHT cells are established in female C3H/HeJ mice.

• Dosaggi

  10-25 mg/kg.

• Somministrazione

  Oral gavage once daily.