BIX 02189

N. catalogoS1531 Lotto:S153102

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Dati tecnici

Formula

C27H28N4O2
Peso molecolare 440.54 Numero CAS 1094614-85-3
Solubilità (25°C)* In vitro Ethanol 80 mg/mL (181.59 mM)
DMSO 60 mg/mL (136.19 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione BIX02189 è un inibitore selettivo di MEK5 con una IC50 di 1,5 nM, inibisce anche l'attività catalitica di ERK5 con una IC50 di 59 nM in saggi senza cellule e non inibisce le chinasi strettamente correlate MEK1, MEK2, ERK2 e JNK2.
Target
MEK5
(Cell-free assay)		 ERK5
(Cell-free assay)
1.5 nM 59 nM
In vitro BIX02189 blocca l'attività catalitica di MEK5 ed ERK5 con valori di IC50 rispettivamente di 1,5 nM e 59 nM. Sono più potenti dell'effetto causato da BIX02188 con valori di IC50 rispettivamente di 4,3 nM e 810 nM. BIX02189 mostra attività inibitoria contro CSF1R (FMS) con IC50 di 46 nM ma non mostra attività contro le chinasi correlate MEK1, MEK2, ERK1, p38α, JNK2, EGFR e STK16 con valori di IC50 >3,7 μM. Il pretrattamento con BIX02189 inibisce la fosforilazione di ERK5 indotta da sorbitolo nelle cellule HeLa in modo dose-dipendente e non mostra alcuna attività inibitoria contro la fosforilazione delle MAPK ERK1/2, p38 e JNK1/2. Il trattamento con solo BIX02189 per 24 ore in cellule HeLa o HEK293 non mostra alcun effetto citotossico. BIX02189 inibisce l'espressione della luciferasi guidata da MEK5/ERK5/MEF2C nelle cellule HeLa e HEK293 con valori di IC50 rispettivamente di 0,53 μM e 0,26 μM. Questo è un effetto più significativo rispetto a quello causato da BIX02188. BIX02189 inibisce l'attivazione di ERK5 e sopprime l'ubiquitinazione di p53 mediata dalla proteina che interagisce con il C-terminale di Hsc70 (CHIP), portando all'inversione dell'effetto protettivo causato dal flusso laminare (L-flow) nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) esposte a 15d-PGJ2. BIX02189 (10 uM) inibisce la fosforilazione di ERK5 e riduce l'attività trascrizionale del fattore 2 di potenziamento dei miociti (MEF2) nei cardiomiociti di ratto neonatali (NRCM) stimolati da isoproterenolo. BIX02189 migliora l'apoptosi indotta da sorbitolo nei NRCM, confermando il ruolo protettivo di ERK5 nei cardiomiociti.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio catalitico

    La proteina MEK5 isolata dal sistema di espressione del baculovirus viene utilizzata per misurare l'attività chinasica utilizzando il reagente di rilevamento ATP PKLight. Il saggio viene eseguito utilizzando 15 nM di GST-MEK5 e 0,75 μM di ATP in un tampone di saggio costituito da 25 mM Hepes, pH 7,5, 10 mM MgCl2, 50 mM KCl, 0,2% BSA, 0,01% CHAPS, 100 μM Na3VO4, 0,5 mM DTT e 1% DMSO in presenza di concentrazioni variabili di BIX02189. La miscela di reazione chinasica viene incubata per 90 minuti a temperatura ambiente seguita dall'aggiunta di 10 μL di reagente di rilevamento ATP per 15 minuti. Il segnale dell'unità di luce relativa (RLU) viene misurato e i segnali RLU vengono convertiti in valori di percentuale del controllo (POC) per la determinazione del valore di IC50.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    HeLa cells

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentration ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    Pretreatment for 1.5 hours

  • Metodo

    The cells are serum starved for 20 hours prior to stimulation with sorbitol at a final concentration of 0.4 M for 20 minutes at 37 °C. BIX02189 is added 1.5 hours prior to the addition of sorbitol. The cells are harvested and lysed in 50 μL RIPA buffer containing Halt protease and phosphate inhibitors at 4 °C for 5-10 minutes. The lysates are centrifuged for 10 minutes at 14,000 rpm and 50 μL lysate is added to 50 μl 2× sample buffer and boiled for 4 minutes at 95 °C. Twenty microliters sample is run on SDS–PAGE 10% Tris-glycine gels and transferred to nitrocellulose. Western blotting is done with appropriate antibodies.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18834865/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22254155/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20075332/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Expression of iNOS, Fra-1, Fra-2, JunB, JunD, and FosB in PMN. (A) PMN were treated with or without SB203580 (40 μM), BIX02189 (30 μM), or SP600125 (40 μM) for 1 h before addition of NDMA (0.74 μg/μl). The cytoplasmic and nuclear fractions obtained from the cells were used to detect iNOS, Fra-1, Fra-2, JunB, JunD, and FosB protein levels by Western blot. The results shown are representative of five independent experiments.</p>

Dati da [ J Immunotoxicol , 2013 , 10, 32-39 ]

Dati da [ J Biol Chem , 2012 , 287, 40722-31 ]

<p>Inhibition of ERK5 suppresses laminar flow-mediated Nrf2-dependent gene expression. B, HUVECs were exposed to atheroprotective flow for 16–24 h in the presence of either DMSO or BIX02189 (10uM). Protein expression of HO-1, NQO1, eNOS, pERK5, ERK5, and tubulin was determined by immunoblotting with specific antibodies. Data are representative from three independent experiments.</p>

Dati da [ J Biol Chem , 2012 , 287, 40722-31 ]

<p>Inhibition of ERK5 suppresses Nrf2 nuclear translocation in mouse aorta in vivo. Nrf2 nuclear translocation in mouse aortic endothelium was analyzed by en face immunofluorescence staining assay using anti-Nrf2 antibody (red). Mice were treated with either 10 mg/kg of BIX02189 (in 25% DMSO) or vehicle control (same volume of 25% DMSO) by ntraperitoneal injection. Endothelium of thoracic aorta was stained with anti-vascular endothelial-cadherin (VE-cadherin) antibody for endothelial cell-cell junction staining (green), Topro3 for nuclear staining (blue), and anti-Nrf2 antibody (red) and photographed under a confocal microscope..</p>

Dati da [ J Biol Chem , 2012 , 287, 40722-31 ]

Sellecks BIX 02189 È stato citato da 75 Pubblicazioni

Integrated drug response prediction models pinpoint repurposed drugs with effectiveness against rhabdomyosarcoma [ PLoS One, 2024, 19(1):e0295629] PubMed: 38277404
Protective effects of macrophage-specific integrin α5 in myocardial infarction are associated with accentuated angiogenesis [ Nat Commun, 2023, 10.1038/s41467-023-43369-x] PubMed: 37985764
Etiopathogenic role of ERK5 signaling in sarcoma: prognostic and therapeutic implications [ Exp Mol Med, 2023, 55(6):1247-1257] PubMed: 37332046
The WNK1-ERK5 route plays a pathophysiological role in ovarian cancer and limits therapeutic efficacy of trametinib [ Clin Transl Med, 2023, 13(4):e1217] PubMed: 37029785
MAP kinase ERK5 modulates cancer cell sensitivity to extrinsic apoptosis induced by death-receptor agonists [ Cell Death Dis, 2023, 14(11):715] PubMed: 37919293
Extracellular signal-Regulated Kinase 5 (ERK5) is required for the Yes-associated protein (YAP) co-transcriptional activity [ Cell Death Dis, 2023, 14(1):32] PubMed: 36650140
MAP kinase ERK5 modulates cancer cell sensitivity to extrinsic apoptosis induced by death-receptor agonists [ Cell Death Dis, 2023, 10.1038/s41419-023-06229-6] PubMed: 37919293
Neuregulin modulates hormone receptor levels in breast cancer through concerted action on multiple signaling pathways [ Clin Sci (Lond), 2023, 137(1):1-15] PubMed: 36511917
Impact of Liver Inflammation on Bile Acid Side Chain Shortening and Amidation [ Cells, 2022, 11(24)3983] PubMed: 36552746
Glucose Starvation or Pyruvate Dehydrogenase Activation Induce a Broad, ERK5-Mediated, Metabolic Remodeling Leading to Fatty Acid Oxidation [ Cells, 2022, 11(9)1392] PubMed: 35563698

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