Dactolisib (BEZ235)

N. catalogoS1009 Lotto:S100916

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Dati tecnici

Formula

C30H23N5O
Peso molecolare 469.55 Numero CAS 915019-65-7
Solubilità (25°C)* In vitro 5%TFA 1.67 mg/mL riscaldato con bagno dacqua a 50 ºC (3.55 mM)
DMSO 0.01 mg/mL (0.02 mM)
Water Insoluble
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ235) è un doppio inibitore ATP-competitivo di PI3K e mTOR per p110α/γ/δ/β e mTOR(p70S6K) con IC50 di 4 nM /5 nM /7 nM /75 nM /6 nM in saggi acellulari, rispettivamente. Inibisce ATR con IC50 di 21 nM in cellule 3T3TopBP1-ER, induce l'autophagy e sopprime la replicazione di HIV-1. Fase 2.
Target
p110α
(Cell-free assay)		 p110γ
(Cell-free assay)		 mTOR (p70S6K)
(Cell-free assay)		 p110δ
(Cell-free assay)		 ATR
(3T3TopBP1-ER cells)		 Visualizza altro
4 nM 5 nM 6 nM 7 nM 21 nM
In vitro Dactolisib (BEZ235) riduce significativamente i livelli di fosforilazione della chinasi p70S6K attivata da mTOR. Ciò si traduce in una riduzione dei livelli di S235/S236P-RPS6 con IC50 di 6,5 nM. L'attività di questo composto contro mTOR è determinata utilizzando un saggio biochimico mTOR K-LISA con IC50 di 20,7 nM. Mostra un'attività leggermente inferiore contro il suo paralogo β con IC50 di 75 nM. La via PI3K/Akt/mTOR è spesso attivata costitutivamente nelle cellule tumorali umane. BEZ235 blocca l'attività chinasica di PI3K e mTOR legandosi al sito di legame dell'ATP di questi enzimi. Entrambe le linee cellulari PTEN-null PC3M e U87MG mostrano una riduzione dose-dipendente della proliferazione cellulare quando trattate con concentrazioni crescenti di Dactolisib con una GI50 media di 10-12 nM. È un inibitore catalitico di mTORC1/2.
In vivo Dactolisib (BEZ235) induce la regressione dei tumori (69%) senza effetti statisticamente significativi sull'aumento di peso corporeo. Nel complesso, questi risultati preliminari di efficacia in vivo mostrano che causa la stasi della malattia quando somministrato per via orale come singolo agente e può migliorare l'efficacia di altri agenti antitumorali se usato in studi di combinazione.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggi in vitro di Protein Kinase, PI3K e mTOR

    Le proteine PI3Kα, β e δ sono composte dal dominio iSH2 di p85 fuso all'estremità NH2 della proteina p110 a lunghezza intera, con l'eccezione dell'α che non contiene gli ultimi 20 amminoacidi. PI3Kγ è prodotta come proteina a lunghezza intera priva dei suoi primi 144 amminoacidi. Tutte le costruzioni sono fuse a un tag His COOH-terminale per una comoda purificazione e quindi clonate nei plasmidi pBlue-Bac4.5 (per le isoforme α, β e δ) o pVL1393 (per l'isoforma γ). I diversi vettori vengono quindi cotrasfettati con DNA genomico BaculoGold WT utilizzando metodi raccomandati dal fornitore per la produzione dei rispettivi baculovirus e proteine ricombinanti. Dactolisib (BEZ235) viene testato per la sua attività contro PI3K utilizzando un saggio Kinase-Glo. La reazione chinasica viene eseguita in una piastra nera a 384 pozzetti. Ogni pozzetto viene caricato con 50 μL di elementi di prova (nel 90% di DMSO) e 5 μL di tampone di reazione contenente 10 μg/mL di substrato PI (l-α-fosfatidilinositolo; Avanti Polar Lipids; preparato in 3% di ottil-glucoside) e le proteine PI3K (10, 25, 10 e 150 nM di p110α, p110β, p110δ e p110γ, rispettivamente) vengono quindi aggiunte ad esso. La reazione viene avviata con l'aggiunta di 5 μL di ATP 1 μM preparato nel tampone di reazione e viene incubata per 60 (per p110α, p110β e p110δ) o 120 min (per p110γ). Viene terminata con l'aggiunta di 10 μL di tampone Kinase-Glo. Le piastre vengono quindi lette in un lettore Synergy 2 per la rilevazione della luminescenza.
Saggio cellulare:

[2]
  • Linee cellulari

    HCT116, DLD-1 and SW480 cells

  • Concentrazioni

    0-1 μM

  • Tempo di incubazione

    48 hours

  • Metodo

    The human CRC cell lines, HCT116 (PIK3CA mutant; kinase domain at H1047R), DLD-1 (PIK3CA mutant; helical domain at E545K), and SW480 (PIK3CA wild-type) and isogenic DLD-1 PIK3CA mutant as well as wild-type cells are maintained in DMEM with 10% FBS and 1 × Penicillin/Streptomycin. Cells are plated at different initial densities (HCT116: 3 × 103 cells/well, DLD-1: 5.5 × 103 cells/well, SW480: 4.5 × 103 cells/well, DLD-1 PIK3CA mutant: 7 × 103 cells/well, and DLD-1 PIK3CA wild-type: 9 × 103 cells/well) to account for differential growth kinetics. After 16 hours, cells are incubated with increasing concentrations of Dactolisib (BEZ235), and the drug-containing growth medium is changed every 24 hours. Cell viability is assessed 16 hours after the initial plating and 48 hours after initiation of treatment with this compound using the colorimetric MTS assay CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, as per the manufacturer's instructions. Cell viability after drug treatment is normalized to that of untreated cells also grown for 48 hours. For western blot analysis, cells are plated with zero or maximum inhibitory dose (500 nM) of it for 2, 6, 24, or 48 hours.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Female Harlan athymic nude mice

  • Dosaggi

    45 mg/kg

  • Somministrazione

    p.o.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18606717/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21966435/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21791089/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20606035/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21412767/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22662154/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20876803/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21552262/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Three-dimensional responses of MCF7/IGF-1R cells to TAM (1 μM), E2 and IGF-1. Compared to parental MCF7 cells (a), MCF7/IGF-1R cells (b) in three-dimensional (3D) culture formed bigger acini in response to IGF-1 stimulation and displayed significant TAM resistance when treated with TAM (1 μM) + E2 + IGF-1, which was removable by kinase inhibitors BMS-536924, U0126 and BEZ235 (c). Cells (10,000/well) were seeded in 96-well plates. Acini were formed on 100% Matrigel and cultured for 14 days in starving medium containing 2% Matrigel and 5% charcoal/dextran-stripped fetal bovine serum with the treatments as indicated. Concentrations used: TAM (1 μM), E2 (1 nM) and IGF-1 (100 ng/mL). Confocal image original magnification, × 20. Red, rhodamine phalloidin (actin). Blue, Hoechst blue stain. Results are representative of two individual experiments.</p>

Dati da [ Breast Cancer Res , 2011 , 13, R52 ]

<p>TAM (10 nM) agonistic behavior in MCF7/IGF-1R cells is not inhibited by phosphatidylinositol 3-kinase/Akt inhibitor BEZ235. (a) Inhibitory effects of kinase inhibitors BMS-536924, U0126 and BEZ235 on agonistic effect of TAM (10 nM) in the presence of IGF-1 (100 ng/mL). **P < 0.01. (b) Inhibitory effects of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt inhibitor BEZ235 at various dose ranges on IGF-1R signaling. (c) Agonistic behavior of TAM (10 nM) in response to BEZ235 kinase inhibitor. (-), no BEZ235. Results are representative of three independent experiments. Data are expressed as means ± SD.</p>

Dati da [ Breast Cancer Res , 2011 , 13:R52 ]

<p>A, ANOVA of IC50 values of the dual PI3K/mTOR inhibitor NVP-BEZ235 in 23 melanoma cell lines showing no significant difference in sensitivity to this compound in B-Raf mutant and Braf wild-type cells. B, decreases in pAkt and pP70S6K in a dose and time-dependent fashion in 2 melanoma cell lines treated with NVP-BEZ235. pP70S6K levels are undetectable at all concentrations and time points studied, whereas levels of pAkt start rising again after 4 hours of drug exposure in a dose-dependent fashion. C, clonogenic assays in 2 melanoma cell lines (YUVON and YUSIK) treated with NVP-BEZ235 at different concentrations. NVPBEZ235 was effective in inhibiting colony formation at low nanomolar concentrations.</p>

Dati da [ Clin Cancer Res , 2010 , 16, 6029-6039 ]

<p>Relative kinase activities of p110α mutants and the inhibitory effect of PI3K inhibitors against hotspot mutants of p110α. A, recombinant FLAG-tagged PI3K p110α/p85α protein complex produced in 293T cells was immunoprecipitated , and the immunoprecipitates were used for the quantitative PI3K-HTRF assay (32).</p><div><div>B, effect of three PI3K inhibitors (ZSTK474, LY294002, and NVP-BEZ235) on the enzymatic activity of two hotspot mutants (E545K and H1047R) p110α compared with the wild-type. No striking difference was observed in the IC50 concentrations of these inhibitors between wild-type and mutant p110α.</div><div> </div></div><p> </p>

Dati da [ Cancer Res , 2010 , 70, 4982-4994 ]

Sellecks Dactolisib (BEZ235) È stato citato da 519 Pubblicazioni

Neuroimmune Microenvironment Reprogramming via Immuno-piezoelectric Transducers for Synergistic Stem Cell Therapy in Traumatic Brain Injury [ Adv Mater, 2025, e12810.] PubMed: 41030193
Ataluren improves hematopoietic and pancreatic disorders in Shwachman-Diamond syndrome patients: a compassionate program case-series [ Nat Commun, 2025, 16(1):8189] PubMed: 40897730
TIGIT deficiency promotes autoreactive CD4+ T-cell responses through a metabolic‒epigenetic mechanism in autoimmune myositis [ Nat Commun, 2025, 16(1):4502] PubMed: 40374622
Spatial covariance reveals isothiocyanate natural products adjust redox stress to restore function in alpha-1-antitrypsin deficiency [ Cell Rep Med, 2025, 6(1):101917] PubMed: 39809267
Heterogeneous Activation of Signaling Pathways and Therapeutic Vulnerabilities in KSHV-Associated Primary Effusion Lymphoma Cell Lines [ J Med Virol, 2025, 97(8):e70534] PubMed: 40751690
Macrophage CCL7 promotes resistance to immunotherapy for colorectal cancer by regulating the infiltration of macrophages and CD8+ T cells [ J Immunother Cancer, 2025, 13(11)e013027] PubMed: 41290259
YAP1 promoter-associated noncoding RNA affects Ewing sarcoma cell tumorigenicity by regulating YAP1 expression [ Cell Mol Biol Lett, 2025, 30(1):63] PubMed: 40414844
Perilipin2-dependent lipid droplets accumulation promotes metastasis of oral squamous cell carcinoma via epithelial-mesenchymal transition [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):30] PubMed: 39875372
Depleting the action of EZH2 through PI3K-mTOR inhibition to overcome metastasis and immunotherapy resistance in triple-negative breast cancer [ Mol Cancer Ther, 2025, 10.1158/1535-7163.MCT-24-0693] PubMed: 40497697
Changes in Melanoma Cell Morphology Following Inhibition of Cell Invasion by Third-Generation mTOR Kinase Inhibitors [ Int J Mol Sci, 2025, 26(16)7770] PubMed: 40869090

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