Atazanavir (BMS-232632) Sulfate

Atazanavir inibisce il clivaggio proteolitico della poliproteina p55 precursore virale gag con IC50 di ~47 nM in cellule H9 infettate dal virus. Atazanavir esibisce una potente attività antivirale con EC50 di 3,89 nM in ceppi RF/MT-2. [1]. Atazanavir è dimostrato essere un inibitore della glucuronidazione della bilirubina con IC50 di 2,4 μM. Atazanavir inibisce l'UGT1A1 ricombinante con Ki di 1,9 μM. [2] Atazanavir inibisce la crescita cellulare nelle linee cellulari di glioblastoma U251, T98G e LN229, con livelli sorprendentemente aumentati di proteine GRP78 e CHOP. Atazanavir provoca un notevole aumento di proteine poliubiquitinate di varie dimensioni diverse nelle cellule di glioblastoma U251. [3] Atazanavir inibisce anche il proteasoma umano 20S con IC50 di 26 μM. Atazanavir (30 μM) modifica le magnitudini dello stress del RE e l'espressione genica dell'UPR nelle cellule HepG2. [4] Atazanavir (30 mM) provoca un aumento di 2,5 volte dell'espressione di P-gp immunoreattiva con diminuzione del Rh123 intracellulare nelle cellule LS180V. [5]

• Saggi di Protease

  Per determinare le costanti di inibizione (Ki) per ogni inibitore di Prt, la Prt di tipo selvaggio HIV-1 RF purificata (2,5 nM) viene incubata a 37 ℃ con 1 μM a 15 μM di substrato fluorogenico in tampone di reazione (1 M NaCl, 1 mM EDTA, 0,1 M acetato di sodio [pH 5,5], 0,1% polietilenglicole 8000) in presenza o assenza di Atazanavir. Il clivaggio del substrato viene quantificato misurando un aumento dell'emissione fluorescente a 490 nM dopo eccitazione a 340 nM utilizzando un Cytofluor 4000. Le reazioni vengono eseguite utilizzando 1,36 μM, 1,66 μM, 2,1 μM, 3,0 μM, 5,0 μM o 15 μM di substrato in presenza di cinque concentrazioni di Atazanavir (1,25 nM a 25 nM). Il clivaggio del substrato viene monitorato a intervalli di 5 minuti per 30 minuti. Le velocità di clivaggio vengono quindi determinate per ciascun campione ai primi punti temporali della reazione, e i valori di Ki vengono determinati dalle pendenze dei grafici di Michaelis-Menten risultanti.

• Linee cellulari

  RF/MT-2 strains

• Concentrazioni

  15 nM

• Tempo di incubazione

  6 days

• Metodo

  To determine cytotoxicity, host cells are incubated in the presence of serially diluted Atazanavir for 6 days and cell viability is quantitated using an XTT[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] assay to calculate the 50% cytotoxic concentrations (CC50s). To assess the effect of human serum proteins on antiviral activity, the 10% fetal calf serum normally used for assays is replaced with 40% adult human serum or 1 mg of α1-acid glycoprotein/mL.