Abiraterone Acetate

Abiraterone mostra una buona complessazione con il ferro eme solo in SM1. [1] Abiraterone blocca la sintesi degli androgeni inibendo CYP17A1. Abiraterone blocca anche la 3β-idrossisteroide deidrogenasi (3βHSD), un enzima assolutamente necessario per la sintesi di androgeni biologicamente attivi. Abiraterone inibisce la conversione del DHEA in Δ⁴-androstenedione. L'inibizione della 3βHSD da parte di Abiraterone blocca la sintesi del DHT e la risposta del recettore degli androgeni. Abiraterone inibisce la conversione del Δ⁵-androstenediolo in testosterone. [2] Abiraterone inibisce la C_17,20-liasi, con un IC50 di 5,8 nM, nei microsomi testicolari di ratto. Abiraterone inibisce significativamente la secrezione di testosterone (−48%) e a sua volta aumenta la concentrazione di LH (192%). [3] Abiraterone inibisce la proliferazione in vitro e l'espressione genica regolata da AR delle cellule di cancro alla prostata AR-positive, il che potrebbe essere spiegato dall'antagonismo di AR in aggiunta all'inibizione della steroidogenesi. [4]

A seguito di somministrazione intraperitoneale in un modello roditore, l'abiraterone è risultato subire una rapida deacetilazione. Quando somministrato come profarmaco acetato (CB 7630), ha soppresso i livelli di testosterone circolante a livelli non rilevabili e ha ridotto marcatamente il peso degli organi sensibili agli androgeni. L'abiraterone è ben tollerato e l'emivita di eliminazione media dell'abiraterone in questi studi è stata di 27,6 h (sostenendo quindi l'uso di una singola dose giornaliera)[5]. Studi preclinici con l'abiraterone hanno dimostrato una riduzione della produzione di androgeni a valle del CYP17 che ha comportato una diminuzione del peso della prostata ventrale, dei testicoli e delle vescicole seminali nei topi[6].

• Saggio di attività della C_17,20-liasi

  I microsomi vengono diluiti a una concentrazione proteica finale di 50 μg/mL nella miscela di reazione che contiene 0,25 M saccarosio, 20 mM Tris-HCl (pH 7,4), 10 mM G6P e 1,2 UI/mL G6PDH. Dopo l'equilibrazione a 37 °C per 10 minuti, la reazione viene avviata con l'aggiunta di βNADP per ottenere una concentrazione finale di 0,6 mM. Prima della distribuzione di 600 μL della miscela di reazione in ogni provetta, i composti di prova vengono evaporati a secchezza sotto un flusso di azoto e quindi incubati a 37 °C per 10 minuti. Dopo l'incubazione con Abiraterone, 500 μL della miscela di reazione vengono trasferiti in provette contenenti 1 μM del substrato enzimatico, 17OHP. Dopo un'ulteriore incubazione di 10 minuti, le provette vengono poste su ghiaccio e la reazione viene arrestata con l'aggiunta di 0,1 ml di NaOH 1N. Le provette vengono congelate e conservate a -20 °C fino al dosaggio dei livelli di Δ4A. Un RIA per Δ4A è sviluppato e automatizzato su un formato a micropiastra nel nostro laboratorio utilizzando un anticorpo specifico contro Δ4A e le istruzioni fornite da Biogenesis. La separazione dell'antigene libero e legato si ottiene con una sospensione di carbone rivestito di destrano. Dopo centrifugazione, aliquote del surnatante chiaro vengono contate in duplicati in un contatore a scintillazione liquida. Le concentrazioni di Δ4A di campioni sconosciuti vengono determinate dalla curva standard. Il limite di rilevazione è 0,5 ng/mL e i coefficienti di variazione intra-saggio e inter-saggio sono rispettivamente 10,7 e 17,6% a un valore di saggio di 13 ng/mL. La velocità della reazione enzimatica è espressa come pmol di Δ4A formato per 10 minuti e per mg di proteina. Il valore dell'attività massima senza inibitore (controllo) è impostato al 100%. I valori di IC50 vengono calcolati utilizzando un'analisi non lineare dal grafico dell'attività enzimatica (%) rispetto al logaritmo della concentrazione dell'inibitore.

• Linee cellulari

  LNCaP and VCaP cells

• Concentrazioni

  0 μM -10 μM

• Tempo di incubazione

  24 hours and 96 hours

• Metodo

  LNCaP and VCaP cells are seeded in 96-well plates and grown in CSS-supplemented phenol red-free or FBS-supplemented media for 7 days. Cells are treated with Abiraterone at 24 hours and 96 hours after plating and cell viability is determined on day 7 by adding CellTiter Glo and measuring luminescence.

• Modelli animali

  Male NOD/SCID mice with LAPC4 cells

• Dosaggi

  0.5 mmol/kg/d

• Somministrazione

  Administered via s.c.