AZD7762

AZD7762, un inibitore di Chk1 più selettivo, inibisce la fosforilazione di Chk1 di un peptide cdc25C legandosi reversibilmente al sito di legame dell'ATP di Chk1, con IC50 di 5 nM e K_i di 3,6 nM. Questo composto induce l'arresto cellulare con EC50 di 0,620 μM e abroga significativamente l'arresto in G2 indotto dalla camptotecina con una EC50 di 10 nM, bloccando la degradazione dipendente da Chk1 di Cdc25A e l'attivazione della Ciclina A. Esso (300 nM) aumenta l'efficacia antitumorale contro SW620 e MDA-MB-231 riducendo i valori di GI50 da 24,1 nM e 2,25 μM a 1,08 nM e 0,15 μM, rispettivamente. [1] Questa sostanza chimica mostra citotossicità contro una varietà di linee cellulari di neuroblastoma con p53 wild type, mutazione p53, amplificazione Mdm2 o delezione p14 con valori di IC50 compresi tra 82,6 e 505,9 nM. [2]

AZD7762 da solo a 25 mg/kg mostra scarsa attività antitumorale nei topi xenotrapiantati H460-DNp53 e nei topi xenotrapiantati SW620, ma quando somministrato in combinazione, questo composto mostra una significativa efficacia antitumorale nei due topi xenotrapiantati con un log cell kill di 0,9 o una percentuale trattato/controllo (%T/C) del 26 anche a basse dosi di 12,5 mg. La somministrazione di questa sostanza chimica in combinazione nel ratto xenotrapiantato H460-DNp53 inibisce il volume del tumore in modo dose-dipendente con valori di %T/C di 48 e 32 per 10 e 20 mg/kg, rispettivamente. Questo composto (25 mg/kg) in combinazione causa una regressione tumorale completa nei topi xenotrapiantati SW620 con il %T/C che aumenta significativamente a -66% e -67%, rispettivamente. [1]

• Saggio Chk1 Kinase

  La Chk1 umana ricombinante è espressa come una fusione di S-transferasi in cellule di insetto usando un vettore di baculovirus e purificata mediante cromatografia di affinità. Un substrato peptidico sintetico (N-biotinilamminoesanoil-KKVSRSGLYRSPMPENLNRPR) per Chk1 viene sintetizzato. Le concentrazioni finali del saggio di peptide e ATP (freddo + 40 nCi [³³P]ATP) sono rispettivamente 0,8 e 1 μM. Diverse concentrazioni di questo composto, tampone contenente il peptide e la Chk1 chinasi e ATP, vengono aggiunte sequenzialmente a una piastra di saggio a 384 pozzetti. La piastra viene incubata per 2 ore, la reazione viene interrotta con l'aggiunta di tampone contenente EDTA e perle per saggio di scintillazione a prossimità, e le piastre vengono lette usando un lettore TopCount. L'analisi dei dati viene eseguita per determinare una risposta alla dose (IC50).

• Linee cellulari

  HT29, SW620 and MDA-MB-231 cells

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentration ~12.5 μM

• Tempo di incubazione

  20 or 48 hours

• Metodo

  For the checkpoint abrogation assay, HT29 cells are treated for 2 hours with camptothecin (topoisomerase I inhibitor; 0.07 μg/mL) to induce the G2 checkpoint. Cells are then treated for 20 hours with a 12-point titration of AZD7762 (12.5 μM to 6 nM) plus nocodazole. Cells are fixed with 3.7% formaldehyde for 1 hour, permeabilized with PBS containing 0.05% Triton X, and incubated with anti-phH3 antibody for 1 hour followed by Alexa Fluor 488 anti-rabbit and Hoechst stain for 1 hour. Mitotic index is determined on the ArrayScan and expressed as the percentage of cells undergoing mitosis. For the potentiation assays, SW620 or MDA-MB-231 cells are dosed for 24 hours with a 9-point titration of ranging from 0.01 to 100 nM with a constant dose of this compound (300 nM). After 24 hours, medium is removed and this chemical alone is added back to the wells for an additional 24 hours. Cells are then incubated in this compound-free medium for an additional 72 hours. The effect on cell proliferation is determined by MTT.

• Modelli animali

  Male NCr mice implanted s.c. with H460-DNp53 cells or SW620, and male rnu rats implanted s.c. with H460-DNp53 cells

• Dosaggi

  ~25 mg/kg

• Somministrazione

  Injection i.v.